胚中心における免疫記憶の誘導、維持に関与する分子機構の解明

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昨年度までに、胚中心の成熟B細胞において、それら以外のB細胞と比較して発現が増強している遺伝子群の中で、リン酸化シグナル伝達に関与している因子として、新規タンパクであるSPH238を単離した。このタンパクについて解析したところ、guanine nucleotide exchange factor (GEF)のひとつであるZizimin1と高い相同性をもち、かつ主要なドメイン構造も一致していることが明らかになった。また、アミノ酸配列や遺伝子がX染色体上に存在するといった状況から、Zizimin2(あるいはDOCK11)として存在が予測されていたタンパクであることが明らかになった。リコンビナントのRhoタンパクを用いたpull-downアッセイにより、Zizimin2はZizimin1と同様にC末端側のCZH2ドメインを介してCdc42に特異的に結合すること、また、Zizimin2をCOS1細胞に過剰発現させるとCdc42が活性化されることから、Zizimin2はCdc42に特異的なGEFであることが示された。Zizimin2について発現解析を行った結果、脾臓、胸腺、骨髄、末梢血リンパ球といった免疫系組織で特異的に発現していることが明らかになった。この結果は、胚、脳、腎臓で発現しているZizimin1とは対照的な結果である。このことからは、Zizimin2は免疫系特異的にCdc42を調節する因子であることが示唆された。これらの実験と並行して、Zizimin1をコンディショナルにターゲティングするベクターで相同組換えしたES細胞をマウス着床前胚に注入し、キメラマウスを作製した