Holliday構造DNAの分岐点移動反応の顕微鏡による直接観察

霍利迪结构 DNA 中分支点转移反应的直接显微镜观察

• 批准号: 02J20139
• 负责人: 韓 龍雲
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J20139/
• 关键词: DNA相同組換; Holliday構造DNA; RuvA-RuvB蛋白質; モーター蛋白質; 一分子イメージング; DNA相同組換え

DNAの転写、合成、分解、巻き戻し、組換えなどの機能を担う蛋白質の多くは、ヌクレオチドを加水分解したときに得られるエネルギーを使って、DNA分子に沿って動きながら機能する分子モーターである。これらのDNA分子モーターの動作原理は、これまでに多くの研究がなされている筋収縮、細胞運動、細胞内物質輸送などに関わる運動蛋白質分子モーターとは異なると考えられ、非常に興味深い。そこで本研究では、1分子イメージング、1分子操作、1分子計測法技術を使い、DNA分子モーターの動きのメカニズムを明らかにすることを目的とする。その中で私は相同組換えの中間体である十字型構造をしたHolliday構造DNAの分岐点移動を光学顕微鏡により直接検出することを試みている。Holliday構造DNAの分岐点移動にはRuvA-RuvB蛋白質複合体が関与している。RuvAがHolliday構造を認識する蛋白質でRuvBがモーター蛋白質である。これまでに観察に必要な十分な長さのHolliday構造DNAを作製した。このHolliday構造DNAは片側がスライドガラス基盤に固定し、もう片側には磁気ビーズをつけることができるように細工をした。そして、今回作製したHolliday構造DNAをスライドガラス上に固定し、磁石でDNAを引っぱり上げ、そこにRuvA、RuvB蛋白質を加え、RuvAB-Holliday構造複合体を形成させ、エネルギー源であるATPを加え、ビーズの回転を観察した。これまでにいくつかのビーズの回転運動を観察することができた。現在、論文に投稿中である。

DNA is composed, synthesized, decomposed, assembled, and functionally related to protein. DNA molecules are composed of molecules that are functionally related to DNA. The mechanism of DNA molecule movement is very interesting. There are many researches on muscle contraction, cell movement and intracellular substance transport. This study is aimed at: 1 molecular biology, 1 molecular manipulation, 1 molecular measurement technology, 1 molecular biology, 1 molecular biology, molecular biology, 1 molecular biology, 1 molecular biology, molecular biology, 1 molecular biology, 1 molecular biology, molecular biology In addition, the intermediate of the same composition can be detected directly by optical microscope. Holliday constructs DNA divergences and shifts RuvA-RuvB protein complexes. RuvA Holliday structure recognition protein RuvB Holliday protein It is necessary to detect the long Holliday DNA sequence. The Holliday structure DNA has been fixed on the substrate side and magnetic field on the substrate side. Holliday structural DNA is immobilized, magnetite DNA is introduced, RuvA and RuvB proteins are added, RuvAB-Holliday structural complex is formed, ATP is added, and recovery is observed. This is the first time I've ever seen a woman's face. Now, the paper is submitted in.

项目成果

Functional overlap between RecA and MgsA (RarA) in the rescue of stalled replication forks in Escherichia coli

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2005.00831.x
• 发表时间: 2005-03
• 期刊: Genes to Cells
• 影响因子: 2.1
• 作者: T. Shibata;T. Hishida;Yoshino Kubota;Yong-Woon Han;H. Iwasaki;H. Shinagawa

Direct evidence that a conserved arginine in RuvB AAA+ ATPase acts as an allosteric effector for the ATPase activity of the adjacent subunit in a hexamer

• DOI: 10.1073/pnas.0403584101
• 发表时间: 2004-06-29
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Hishida, T;Han, YW;Shinagawa, H
• 通讯作者: Shinagawa, H