バイオビーズおよびプロトプラストを用いた植物形質転換法の開発

使用生物珠和原生质体开发植物转化方法

• 批准号: 13760238
• 负责人: 村川 智子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Sasebo National College of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760238/
• 关键词: バイオビーズ; プロトプラスト; 遺伝子発現

バイオビーズおよびプロトプラストを用いた形質転換体の獲得には1)バイオビーズ(供与体DNA)のプロトプラスト(受容体細胞)への取り込み、2)受容体DNAでの組み換え、3)形質の発現、の3つの過程が必要である。まず、バイオビーズについてであるが、遺伝物質としてプラスミドDNAを吸着させた約1〜2μmのバイオビーズの作製が可能となった。作製方法としては、有機溶媒とアルギン酸ナトリウムおよびプラスミド溶液を超音波式ホモジナイザーで激しく撹拌することにより、エマルジョン化し、その後、有機溶媒を除去することにより均一な大きさのバイオビーズを大量に作製することが可能となった。また、プロトプラスト(tobacco SR-1)内へのバイオビーズの接触・導入については、細胞融合を行う際に広く用いられているポリエチレングリコール(PEG)溶液を使用した。その際、PEGの分子量、濃度、また処理時間等の操作方法についても検討を行った。その結果、40%PEG6000溶液で30分間処理することにより、導入直後(24時間後)において、バイオビーズによる遺伝子発現(CFP発現)を確認することができたと共に、naked DNAと比較して高効率で遺伝子発現することがわかった。遺伝子発現を確認できた系については、更に細胞生育への影響について観察を行った。その結果、細胞分裂を経て、カルス形成、茎葉分化と生育は順調で、プラスミドDNAを包摂したバイオビーズは、形質転換体の獲得に向けて非常に有望なベクターであることが示唆された。

In this case, we need to know that the DNA (donor) and recipient cells (recipient cells) need to be obtained, 2) the DNA of the recipient will be detected, and 3) the necessary information will be obtained in the course of the procedure. I don't know, I don't know. The method of operation is to use the organic solvent, the organic solvent, the acid, the acid, the solution, the ultrasonic solution, the ultrasonic solution, the solution. In the cell fusion line, the cell fusion line is used in the cell fusion line, and the cell fusion line is used in the cell fusion line. The cell fusion line is used to use the PEG solution. The operation methods such as temperature, PEG molecular weight, temperature, temperature and temperature. The results showed that the 40%PEG6000 solution was analyzed within 30 minutes, after 24 hours (24 hours), the temperature was detected (CFP), and the results of naked DNA were higher than that of the control. The baby now confirms that the baby is pregnant and that the baby has a negative effect on the pregnancy. The results, cell division, formation, stem differentiation, fertility, DNA package, and the shape of the body are expected to show signs of instigation.