慢性関節リウマチ罹患関節局所におけるBLySの発現とそのB細胞に対する作用

慢性関節リウマチ8症例、対照として変形性関節症2症例より関節滑膜を採取。BLyS免疫組織染色用に凍結切片を作成。残りの滑膜組織よりcollagenaseを用いて単核球を抽出。表面抗原を解析。疾患の病勢に比例してB細胞の占める比率が10%程度まで上昇することを確認。B細胞全体に占める幼弱B細胞の比率も病勢に比例することを確認。これはBLySにより幼弱B細胞のapoptosisが回避されるという報告に合致する。関節滑膜より抽出したB細胞をマグネットビーズを用い表面抗原の変化による成熟度に応じて亜集団化、それぞれの亜集団よりmRNAを抽出しRT-PCR法を用いて免疫グロブリンVH遺伝子のcDNAライブラリーを作成。各遺伝子の使用頻度、突然変異の頻度と発生部位、receptor revisionの発生頻度について解析中。関節液中の遊離BLyS測定のためのELISA法を確立。BLySのmRNA発現定性、定量用のRT-PCR法を確立。今後、採取された滑膜組織および分離細胞でのBLyS発現を測定し発現の局在を確認する。関節液中の遊離BLyS測定も対照症例数の蓄積をすすめる。in vitroでT細胞依存性、非依存性刺激下の精製B細胞にBLySを添加し、その活性、増殖。apoptosisに対する影響を観察する。BLyS添加条件で培養されたB細胞群の免疫グロブリン遺伝子ライブラリーを作成し、滑膜組織から得られたものとの比較を行う。

慢性関節リウマチ8症例、対照として変形性関節症2症例より関節滑膜を採取。BLyS免疫組織染色用に凍結切片を作成。残りの滑膜組織よりcollagenaseを用いて単核球を抽出。表面抗原を解析。疾患の病勢に比例してB細胞の占める比率が10%程度まで上昇することを確認。B細胞全体に占める幼弱B細胞の比率も病勢に比例することを確認。これはBLySにより幼弱B細胞のapoptosisが回避されるという報告に合致する。関節滑膜より抽出したB細胞をマグネットビーズを用い表面抗原の変化による成熟度に応じて亜集団化、それぞれの亜集団よりmRNAを抽出しRT-PCR法を用いて免疫グロブリンVH遺伝子のcDNAライブラリーを作成。各遺伝子の使用頻度、突然変異の頻度と発生部位、receptor revisionの発生頻度について解析中。関節液中の遊離BLyS測定のためのELISA法を確立。BLySのmRNA発現定性、定量用のRT-PCR法を確立。今後、採取された滑膜組織および分離細胞でのBLyS発現を測定し発現の局在を確認する。関節液中の遊離BLyS測定も対照症例数の蓄積をすすめる。in vitroでT細胞依存性、非依存性刺激下の精製B細胞にBLySを添加し、その活性、増殖。apoptosisに対する影響を観察する。BLyS添加条件で培養されたB細胞群の免疫グロブリン遺伝子ライブラリーを作成し、滑膜組織から得られたものとの比較を行う。