糖尿病心の心筋細胞リモデリングにおけるインスリンシグナルの役割

胰岛素信号在糖尿病心脏心肌细胞重塑中的作用

• 批准号: 13770370
• 负责人: 宮崎 秀和
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770370/
• 关键词: 糖尿病; リモデリング; 心筋細胞

Sprague Dawleyラットを用い、コントロール(C)群とインスリン治療群(DM-I)群の2群に分けた。(DM-I)群ではストレプトゾトシン(50mg/kg)を尾静脈より静注し、糖尿病を発症させた後、インスリン(regular insulin 1-2U/100g 体重/日)で治療を行なった。糖尿病発症4,8,12週後に心エコー検査を施行後以下の実験を行なった。ラット心を摘出しcollagenaseを含むJoklik's mediaで灌流した後、左心室筋を切離し、単離心筋細胞を作製し、単離心筋細胞を作製した。単離心筋細胞を1.5%glutaraldehydeで固定した後Computer image analyzerにより、組織学的に心筋細胞の長径を測定するとともに、Coulter Channelyzerを使用し平均細胞体積を測定した。平均細胞体積/平均細胞長より平均断面積を算出、さらに平均断面積より平均細胞径を算出した。平均細胞体積、細胞長、断面積、心筋細胞長/平均細胞径を指標とし、心筋細胞のリモデリングについて評価した。さらに、凍結した心室筋をTris buffer内でhomogenizeした後55000gで遠心分離し、上清中のタンパク溶液を抽出した。抗phosphotyrosine抗体を使用して、immunoblotting法を用いてtyrosineのリン酸化の程度を評価するとともに、northern blotting法を用いてc-fos, c-jun発現の程度を評価した。<結果>昨年度の実験で、糖尿病発症4週で、左室心筋細胞の断面積、径の減少が見られたが、インスリン投与により、これらの変化は軽減した。immunoblotting法では、糖尿病発症4週より、tyrosineのリン酸化が抑制され、c-fos, c-jun発現も減少したが、これらの変化もインスリン投与により、軽減した。この結果より、インスリンによって早期に起こるtyrosineのリン酸化を介したシグナリングの抑制が、糖尿病における心筋細胞のリモデリングに関与している可能性が考えられた。

Sprague Dawley Therapy is divided into two groups: the Kontorokari (C) group and the Insanslin Treatment (DM-I) group. (DM-I) group was administered intravenously (50mg/kg) to treat diabetes mellitus (diabetes mellitus). Diabetes mellitus 4, 8, 12 weeks after the heart test, the implementation of the following follow-up Joklik's media is used to extract collagenase from the heart, to isolate the left ventricular tendon, and to control the left ventricular tendon. After fixation with 1.5% glutaraldehyde, the length of tendon cells was determined by using a Computer image analyzer and Coulter Channelyzer Average cell volume/average cell length Average cross-sectional area Average cell diameter Average cell volume, cell length, cross-section area, muscle cell length/average cell diameter, muscle cell separation and evaluation After 55000g of centrifugation, the supernatant was extracted from the ventricular tendon in the frozen Tris buffer To evaluate the degree of acidification of cytosine using immunoblotting and to evaluate the degree of c-fos, c-jun development using northern blotting. <Results> At the end of last year, the cross-sectional area and diameter of left ventricular tendon cells decreased at 4 weeks after diabetes onset. The immunoblotting method can inhibit the development of diabetes by 4 weeks, and reduce the occurrence of tyrosine, c-fos, c-jun. The results of this study are as follows: 1. The possibility of early onset of tyrosine acidification and inhibition of diabetes mellitus is examined.