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自家間葉系幹細胞を用いた膝半月板代用材料の開発

利用自体间充质干细胞开发膝关节半月板替代材料

基本信息

批准号：
13770793
负责人：
鳥塚之嘉
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒト骨髄間葉系細細胞はhomogeneousな線維芽細胞様細胞の集団であった。ヒト骨髄間葉系細胞は過去の文献と同様な表面抗原の発現パターンであった。このような細胞群を用い、コラーゲンscaffoldに播種して、施行した3次元培養の結果、scaffold内には十分な数の細胞が存在しており、in vitroでの培養が可能であることがわかった。また、これらはI, II, III型コラーゲン,アグリカンのmRNAを発現していることが明らかになった。2.ヒトの細胞に対する荷重の影響を検討する前に、ラット骨髄間葉系細胞を用いて至適条件の決定を行った。同様に播種したコラーゲンscaffold中の細胞のviabilityをDNA量で評価すると、3日目までは増加し、7日目には減少していた。7日目でH.E.染色にて細胞はscaffold内部まで比較的均一に存在しており,構造物であるコラーゲンへの接着も良好であった。同日の培養組織において,1,2,3型コラーゲン,アグリカン,biglycan, decorin, versican,の発現がノザンブロッティング法により確認されており、培養上清中にコンドロイチン硫酸量が検出された。本結果はコラーゲンscaffoldを用いた骨髄間葉系細胞の3次元培養が、半月板代用材料として有効である可能性を示唆するものである。次に、荷重下での評価を行った。コラーゲンscaffoldのstrainが5-15%となるように負荷を,1Hzで10分/日でかけた場合、7日後のDNA1ugあたりのコンドロイチン硫酸量は0.38ugであり、荷重負荷をかけなかった場合の0.36ugと比し、有意差は認められなかった。荷重により細胞のviabilityが大きく変化することも明らかになり、至適荷重とその頻度については、今後も条件を変えた検討が必要である。

1. The cells of the interleaf system of the bone are homogeneous and the cells of the interleaf system are homogeneous. The development of cell surface antigens in the bone marrow cells is similar to that in the past The number of cells in the scaffold can be increased by seeding and performing three-dimensional culture. The expression of mRNA in type I, II and III DNA was detected by PCR. 2. To investigate the influence of cell load on bone marrow mesenchymal stem cells, and to determine the optimal conditions for cell use. The viability of cells in the scaffold was evaluated on the third day, increased on the third day, and decreased on the seventh day 7. H.E. staining cells are relatively uniform in the scaffold, and structures are relatively uniform in the scaffold. On the same day, the culture tissue was identified by the method of identification and detection of the sulfuric acid content of type 1, 2, 3 and type 2, type 1, type 2, type 3 and type 3. These results demonstrate the possibility of using meniscus substitute materials in three-dimensional culture of mesenchymal cells. The second time, the load is under evaluation. The strain of the scaffold is 5-15% and the load is 1Hz, 10 minutes/day, 7 days later, the amount of sulfuric acid in the DNA1ug is 0.38ug and the load is 0.36ug. Load, cell viability, maximum load, frequency, future conditions, etc.