高感度尿中癌細胞検出法の開発・Light cyclerを用いたhTRTの定量化

开发高灵敏度泌尿系癌细胞检测方法并使用光循环仪对 hTRT 进行定量

• 批准号: 13770875
• 负责人: 西野 好則
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770875/
• 关键词: hTRT; リアルタイム定量的RT-PCR; 尿路上皮癌; 膀胱癌; 尿細胞診; 尿路性器悪性腫瘍; テロメラーゼ; Light cycler; PCR法

今回我々はHuman telomerase reverse transcriptase (hTRT) mRNAのreverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR)用に2組のoligonucleotide primerを設計した。このうち1組はリアルタイム定量的RT-PCRのHybridization probe法にも使用できるオリゴプライマーである。樹立された癌細胞株を用いて至適条件を決定した。細胞のhTRT mRNAの測定と同時にhouse keeping geneであるporphobilinogen deaminase (PBGD) mRNAを測定し、hTRT mRNA /PBGD mRNAを算出してこれを検体のhTRT発現量とした。膀胱癌の臨床検体67例を用いて、hTRTの発現量を検討した。正常膀胱粘膜10例ではhTRT mRNAの発現は認めなかった。癌組織は全例でhTRT mRNAの発現を認めたが、hTRT発現量の検討では異型度、病理学的進達度、DNA ploidyとの間に有意な相関は認めなかった。また、膀胱全摘症例33例の検討ではhTRT高発現群とhTRT低発現群との間に生命予後に統計学的な有意差を認めなかった。尿中剥離細胞でのhTRT mRNAの検出について検討した。尿にはmRNAを破壊するRNaseが存在するため、採尿後mRNAの抽出までに時間を要した検体でのhTRT mRNAの検出は困難であった。またhTRTの発現量は尿中の浮遊癌細胞数に比例したが、癌細胞数が少なくなるほど発現量との相関が悪くなった。臨床検体からのhTRT mRNAの検出は、今回の検討では特異度は高かったが、尿細胞診と比較して感度は悪かった。

This time we use the Human telomerase reverse transcriptase (hTRT) mRNA reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) to design the design of the oligonucleotide primer in two groups. In group 1, the quantitative RT-PCR Hybridization probe method was used to determine the quantity of the drug. The cancer cell line was determined by the condition from the cell line to the cell line. At the same time, house keeping gene test porphobilinogen deaminase (PBGD) mRNA measurement, hTRT mRNA