下垂体細胞におけるエキソサイト-シス-エンドサイト-シス連関機構の解析

垂体细胞胞吐-顺式-内吞-顺式耦合机制分析

• 批准号: 13770913
• 负责人: 池淵 佳秀
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770913/
• 关键词: P型カルシウム・チャンネル; ACTH分泌細胞; エキソサイトーシス; エンドサイトーシス; AtT-20; FM1-43; ω-Agatoxin TK

下垂体前葉細胞のホルモン分泌細胞にP型カルシウム・チャンネルが発現しているかどうかを検討するために、抗P型カルシウム・チャンネル抗体と下垂体各種ホルモンの抗体を使い、免疫組織化学的手法(2重染色)で検討した結果、下垂体前葉細胞中では驚くことにACTH分泌細胞のみにP型カルシウム・チャンネルの発現を認めた。局在に関しては、免疫電子顕微鏡染色法を用い、ACTH分泌顆粒膜上にチャンネルの局在を示唆する結果を得た。そこで実際P型カルシウム・チャンネルがACTH分泌細胞のエキソサイトーシス-エンドサイトーシス連関機構に関与しているかどうかを検討するために、免疫蛍光染色法でP型カルシウム・チャンネルの発現を確認したAtT-20(ACTH producing cell line)を用いて実験を行った。エキソサイトーシス-エンドサイトーシス連関機構の解析方法としては、以前我々が開発した方法を改良し、還流装置を用いて膜標識蛍光色素(FM1-43)の蛍光像をCCDカメラで取得し経時的変化を解析する方法を用いた。そしてP型カルシウム・チャンネルの阻害剤(ω-Agatoxin TK)がACTH分泌細胞のエキソサイトーシス-エンドサイトーシス連関機構に関与する可能性を示唆する結果を得ている。現在、今までのところをまとめて、第75回日本内分泌学会に発表予定であり、また雑誌に投稿準備中である。今後は、ACTH分泌細胞におけるこのエキソサイトーシス-エンドサイトーシス連関機構が、他の下垂体前葉細胞にどのような影響があるかを検討する方向で準備中である。

P-type ACTH secreting cells in anterior lobe of the pituitary gland were detected by immunohistochemistry (double staining). Anti-P-type ACTH secreting cells were detected by anti-P-type ACTH secreting cells. The results were obtained by immunoelectron microscopic staining of ACTH secretion granules on the surface of the membrane. P-type cell growth was confirmed by immunoluminescence staining, and ATT-20(ACTH producing cell line) was used to detect the presence of ACTH secreting cells. A method for analyzing the optical image of a film marker dye (FM1 -43) by CCD is proposed. The results show that the P-type inhibitor (ω-Agatoxin TK) can be used to investigate the mechanism of ACTH secretion in ACTH secreting cells. The 75th Japanese Endocrinology Society is preparing for submission. In the future, ACTH secreting cells will be affected by the mechanisms involved in their anterior lobe cells.