電気泳動法による水溶性酵素の機能構造一斉分析法の開発

开发利用电泳同时分析水溶性酶功能结构的方法

• 批准号: 14740405
• 负责人: 島崎 洋次
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14740405/
• 关键词: 電気泳動; 質量分析; 酵素活性; 一斉分析; タンパク質

平成14年度に引き続き、動物肝臓や網膜にある水溶性酵素を生体内に存在するのに近い条件(生理的条件)の2次元電気泳動法で分離し、その酵素活性を網羅的に調べ、その知見を収集した。また、この2次元電気泳動法で分離された酵素の1次構造の解析をマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計やエレクトロスプレーイオン化タンデム型質量分析計を用いて網羅的に行い、その知見を蓄積した。これら収集した水溶性酵素の活性と1次構造の知見を対応させ、酵素活性と構造の情報を網羅した2次元電気泳動地図の作成を行なった。また、この地図を用いて、酵素活性阻害剤や薬剤などが酵素活性を阻害をする際に、それが特異的なのか、非特異的なのかを調べることができることを示した。これらの情報は国外の専門学術雑誌に公表した(Y.shimazaki, Y.Sugawara, T.Manabe.Proteomics (in press),2004:Y.Shimazaki, Y.Hiraga, M.Uesugi, T.Manabe.Biochimica et Biophysica Acta Vol.1696.p 51-57,2004:Y.Shimazaki, Y.Sugawara, Y.Ohtsuka, T.Manabe Proteomics Vol.3.p 2002-2007,2003)。

In 2014, we collected information on the conditions (physiological conditions) for the existence of water-soluble enzymes in animal liver and retina, and on the isolation and regulation of enzyme activities by two-dimensional electrophoresis. The analysis of the primary structure of the enzyme separated by two-dimensional electrokinetic method supports the separation of time-of-flight mass spectrometry and the accumulation of knowledge in the process of separation. The activity of water-soluble enzymes is the key to the formation of the two-dimensional electrokinetic system. The enzyme activity inhibitor is used to inhibit the enzyme activity. The enzyme activity inhibitor is used to inhibit the enzyme activity. The enzyme activity inhibitor is used to inhibit the enzyme activity. This information is published in the journal of foreign academic studies (Y.shimazaki, Y.Sugawara, T.Manabe.Proteomics (in press), 2004:Y.Shimazaki, Y.Hiraga, M.Uesugi, T.Manabe.Biochimica et Biophysics Acta Vol.1696.p 51-57,2004:Y.Shimazaki, Y.Sugawara, Y.Ohtsuka, T.Manabe Proteomics Vol.3.p 2002-2007,2003).

项目成果

Y.Shimazaki, Y.Sugawara, Y.Ohtsuka, T.Manabe: "Analysis of the Activity and Identification of Enzymes After Separation of Cytosol Proteins in Mouse Liver by Microscale Nondenaturing Two-dimensional Electrophoresis"Proteomics. 3. 2002-2007 (2003)

Y.Shimazaki、Y.Sukawara、Y.Ohtsuka、T.Manabe：“通过微型非变性二维电泳分离小鼠肝脏中的细胞质蛋白后酶的活性分析和鉴定”蛋白质组学。

Youji Shimazaki, Hiromi Ohnishi, Satoshi Matsuura, Takashi Manabe: "Simple quantification of Cu, Zn-superoxide dismutase activity after separation by non-denaturing isoelectric focusing"Biochimica et Biophysica Acta. 1571. 245-248 (2002)

Youji Shimazaki、Hiromi Ohnishi、Satoshi Matsuura、Takashi Manabe：“通过非变性等电聚焦分离后铜、锌超氧化物歧化酶活性的简单定量”Biochimica et Biophysicala Acta。

島崎洋次, 平加容子, 大西弘美, 真鍋敬: "未変性条件の2次元電気泳動法による水溶性タンパク質の酵素活性解析"分析化学. 51巻・6号. 367-371 (2002)

Yoji Shimazaki、Yoko Hiraka、Hiromi Onishi、Takashi Manabe：“在天然条件下通过二维电泳进行水溶性蛋白质的酶活性分析”，《分析化学》第 51 卷，第 6 期，第 367-371 期（2002 年）。

Y.Shimazaki, Y.Hiraga.M.Uesugi, T.Manabe: "Simultaneous analysis of esterase and transferase activities in cytosol proteins from the bovine retina by using microscale nondenaturing two-dimensional electrophoresis"Biochimica et Biophysica Acta. 1696. 51-57

Y.Shimazaki、Y.Hiraga.M.Uesugi、T.Manabe：“使用微尺度非变性二维电泳同时分析牛视网膜胞质蛋白中的酯酶和转移酶活性”Biochimica et Biophysicala Acta。

Y.Shimazaki, Y.Sugawara, T.Manabe: "Nondenaturing two-dimensional electrophoresis enzyme profile involving activity and sequence structure of cytosol proteins from mouse liver."Proteomics. In press. (2004)

Y.Shimazaki、Y.Sugarara、T.Manabe：“非变性二维电泳酶谱涉及小鼠肝脏胞质蛋白的活性和序列结构。”蛋白质组学。