キノプロテイン-アミン脱水素酵素触媒反応メカニズムの解析

醌蛋白-胺脱氢酶催化反应机理分析

• 批准号: 14760074
• 负责人: 高木 一好
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Ritsumeikan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760074/
• 关键词: ヒスタミン; アミン脱水素酵素; 酸化還元反応; バイオセンサー; 酸化還元酵素

今年度の研究においては、昨年度から取り組んでいるグラム陽性細菌Noncardioides smiplex IFO 12069の可溶性画分から精製したヒスタミン脱水素酵素(HmDH)について、HmDHを用いた新しいヒスタミンバイオセンサー(HmDH機能電極)、ならびに、HmDH機能電極を検出部位としたヒスタミンに対するフローインジェクションアナリシス(FIA)システムの開発・検討を実行した。昨年度の報告書にも記述したように、グラッシーカーボン電極表面に、HmDHと電子伝達メディエーターであるオスミウム錯体の両方を固定化した機能電極を作成し、新たにFIAシステムの検出部位とした。実サンプル中に存在すると考えられるアスコルビン酸による妨害を取り除くため、ヒスタミン検出部位の上流に前処理部位を取り付けた。食品分析の現場での利用を想定し、実サンプルを用いた特性評価を行ったところ、通常用いられるHPLC-蛍光検出法と比較して、分析時間の短縮を達成すると同時に分析値の高い相関性が観測され、本FIAシステムが現場で利用可能であることを示した。一方、新たなアミン脱水素酵素としてAlcaligenes xylosoxidans IFO 13495より見い出されたアミン脱水素酵素について、その基本特性の検討も行った。既に報告されているAlcaligenes faecalis IFO 14479由来の芳香族アミン脱水素酵素と比較して、基質特異性に似かよった傾向があるが必ずしも一致しない。また、中性溶液における総電荷は大きく異なる。現在、本酵素の活性中心の構造、ならびに菌体内での電子伝達反応について、引き続き検討を行っている。

This year, the <s:1> study にお にお て て て, and last year, the んで ら and るグラム positive bacteria Noncardioides smiplex IFO from the <s:1> group were collected at ら 12069 の soluble painting か ら refined し た ヒ ス タ ミ ン dehydrated vegetable enzyme (HmDH) に つ い て, HmDH を with い た new し い ヒ ス タ ミ ン バ イ オ セ ン サ ー (HmDH function electrode), な ら び に, HmDH functional electrode を 検 out parts と し た ヒ ス タ ミ ン に す seaborne る フ ロ ー イ ン ジ ェ ク シ ョ ン ア ナ リ シ ス (F IA)システム システム develop · 検 seek を perform た. Yesterday's annual report on の に も account し た よ う に, グ ラ ッ シ ー カ ー ボ ン electrode surface に, HmDH と electronic 伝 da メ デ ィ エ ー タ ー で あ る オ ス ミ ウ ム misprinted の struck party を immobilized し た function electrode を し consummate, new た に FIA シ ス テ ム の 検 out parts と し た. Be サ ン プ ル に exist す る と exam え ら れ る ア ス コ ル ビ ン acid に よ る sabotage を take り except く た め, ヒ ス タ ミ ン 検 out parts before の high-class に 処 him parts を take り pay け た. Food analysis の field で の using を し scenarios, be サ ン プ ル を with い た characteristics evaluation 価 を line っ た と こ ろ, usually use い ら れ る HPLC - 検 蛍 light out method と し て, short analysis time の shrinkage を reached す る と に analysis at the same time numerical の high い phase masato が 観 measuring さ れ, the FIA シ ス テ ム が field で use may で あ る こ と を shown し た. One party, the new た な ア ミ ン dehydrated vegetable enzyme と し て Alcaligenes xylosoxidans IFO 13495 よ り see い out さ れ た ア ミ ン dehydrated vegetable enzyme に つ い て, そ の basic characteristics の 検 line for も っ た. Both に report さ れ て い る Alcaligenes faecalis IFO 14479 origin の aromatic ア ミ ン dehydrated vegetable enzyme と compare し て, substrate specificity に か よ っ た tendency が あ る が will ず し も consistent し な い. Youdaoplaceholder0, the charge of a neutral solution における総 is また greater than that of a く opposite なる. の now, the enzyme active center の structure, な ら び に bacteria in vivo で の electronic 伝 of anti 応 に つ い て and き 続 き 検 line for を っ て い る.

项目成果

Kazuyoshi Takagi, Susumu Shikata: "Flow injection determination of histamine with a histamine dehydrogenase-based electrode"Analytica Chimica Acta. 505(2). 189-193 (2004)

Kazuyoshi Takagi、Susumu Shikata：“使用基于组胺脱氢酶的电极流动注射测定组胺”Analytica Chimica Acta。