アンチザイムの細胞内局在と相互作用分子の一細胞イメージング

抗酶亚细胞定位和相互作用分子的单细胞成像

• 批准号: 14780494
• 负责人: 村井 法之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780494/
• 关键词: アンチザイム; リン酸化; 細胞内局在; EGFP; GFP

前年度までに、AZ2が核に主に局在するタンパク質であること、またAZ2の186番目のセリンが細胞内でリン酸化され、そのリン酸化酵素はCasein Kinase II(CKII)である可能性が非常に高いことを明らかにした。今年度は、以下のことを行った。AZ2を3つの領域.(1〜32,33〜97,98〜189アミノ酸)に分割し緑色蛍光タンパク質(EGFP)に連結させ、その細胞内局在を調べ、どの領域がAZ2の核局在に重要であるか解析した。その結果1〜32および33〜97をEGFPに付加したものは細胞質と核の両方に存在している細胞がほとんどであるのに対し、C末端の98〜189領域を付加したEGFPは核局在するものが増加した。このことはAZ2のこのC末端領域が核局在に重要であることを示唆するものである。現在さらに詳細に解析中である。次に、AZ2の核局在をより詳しく解析するためにNIH3T3細胞にEGFPとAZ2の融合タンパク質(EGFP-AZ2)を発現させ、核を染色試薬Hoechst33342で染色しHoechst33342とEGFPの蛍光の局在を蛍光顕微鏡で高倍率にて生細胞を解析した。その結果、興味深いことに核内のAZ2はクロマチンがあまり凝集していないいわゆるユークロマチン領域に局在していたことを見出した。このことはAZ2がユークロマチンと相互作用している可能性を想像させる。現在核内でAZ2と相互作用するタンパク質をTandem Affinity Purification(TAP)株などにより探索している。さらに細菌EGFP-AZ2を発現させた細胞にプロテアソーム阻害剤MG132を添加するとAZ2の核局在が増強されることを見出した。このことについても解析中である。

In the previous year, the main office of the AZ2 nuclear power plant was very sensitive to the possibility of intracellular acidification, acidification enzyme Casein Kinase II (CKII), acid enzyme, acid enzyme, and so on. In the current year, the following will be held in the first place. AZ2 "3" field. (1, 32, 33, 97, 98, 189, and acid) split the color, light, light, (EGFP) link, intracellular location, and AZ2 domain in the nuclear bureau. Results 1

项目成果

Hascilowicz T, Murai_N, Matsufuji S, Murakami Y.: "Regulation of ornithine decarboxylase by antizymes and antizyme inhibitor in zebrafish (Danio rerio)"Biochem. Biophysi. Acta. 1578(1-3). 21-28 (2002)

Hascilowi​​cz T、Murai_N、Matsufuji S、Murakami Y.：“斑马鱼（Danio rerio）中抗酶和抗酶抑制剂对鸟氨酸脱羧酶的调节”Biochem。

Murai N., Murakami Y., Matsufuji S.: "Identification of Nuclear Export Signals in Antizyme1"J.Biol.Chem. 278(45). 44791-44798 (2003)

Murai N.、Murakami Y.、Matsufuji S.：“Antizyme1 中核输出信号的识别”J.Biol.Chem。