小脳脳室帯でのニューロン産生におけるペプチド性ホルモンGhrelinの機能解明

阐明肽激素 Ghrelin 在小脑室区神经元生成中的功能

• 批准号: 14780576
• 负责人: 吉川 文生
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780576/
• 关键词: ペプチドホルモン; Ghrelin; Growthhormone secretagogue receptor; Gタンパク共役型受容体; 小脳; プルキンエ細胞; 脳室帯; ニユーロン産生; Gtowthhomone secretagogue receptor; Gタンパク質共役型受容体; ニューロン産生; 小脳核; ペプチド; ホルモン

ペプチドホルモンGhrelinは、成体では胃、視床下部、胎盤などから分泌され下垂体前葉に作用し成長ホルモン分泌を促進する。GhrelinのレセプターであるGrowth hormone secretagogue receptor (GHS-R)はGタンパク共役型受容体で細胞内Ca2+上昇を誘導する。GHS-Rは成体は下垂体前葉、視床下部、海馬などに発現することが知られているが、胎生期脳での役割は全く不明である。研究代表者は、シグナルシーケンストラップ法、RT-PCR法、In situ hybridization histochemistry法によって、胎生期マウスの脳においてGHS-Rが胎生11〜12日に一過的に小脳脳室帯に限局して発現することを見出した。これは小脳プルキンエ細胞や小脳核ニューロンが産生される時期と場所に一致する。本研究課題は小脳ニューロン産生におけるGhrelinの役割を解明することを目的とする。マウスGHS-R cDNAクローニングに成功した。ウサギポリクローナル抗GHS-R抗体を作製した。ウエスタンブロットによりリコンビナントGHS-Rを特異的に認識することを確認したが、胎生12日マウスの脳では、ウエスタンブロットと免疫組織化学染色で特異的なシグナルは検出できなかった。組織固定法などの条件を試行中である。マウスcDNA由来のGHS-Rを培養細胞に発現させ、カルシウム濃度指示薬Fura-2を用いてGhrelinに対する反応性を確認した。体内埋め込み型の浸透圧ポンプを用いることにより、妊娠10日目のマウス腹腔内にGhrelin (1mM)を持続的に投与したとき、胎児の小脳形態について解析したが・対象と比較して有意な差は見出せなかった。

肽激素生长素素在胃，下丘脑，胎盘等的成年人中分泌，并作用于垂体前腺体，促进生长激素分泌。生长素蛋白受体生长马促分泌受体（GHS-R）在G蛋白偶联受体上诱导细胞内Ca2+升高。已知GHS-R在垂体前腺，下丘脑，海马等人的成年人中表达，但其在胎儿脑中的作用是完全未知的。首席研究者发现，通过信号测序束，RT-PCR和原位杂交组织化学方法，在胚胎小鼠的第11-12天，在胚胎小鼠的胚胎小鼠的大脑中瞬时表达GHS-R。这与小脑普林吉细胞和小脑神经元的产生时间和位置相吻合。该研究主题旨在阐明生长素素在小脑神经元产生中的作用。小鼠GHS-R cDNA克隆成功。制备了兔多克隆抗GHS-R抗体。 Western blot证实，它特别识别重组GHS-R，但是通过蛋白质印迹和免疫组织化学染色，在胚胎小鼠的大脑中无法检测到特定的信号。正在尝试诸如组织固定方法之类的条件。源自小鼠cDNA的GHS-R在培养的细胞中表达，并使用钙浓度指示剂fura-2确认对生长素蛋白的反应性。当使用可植入的渗透泵连续将生长素（1 mM）连续地腹膜内腹膜内给予怀孕的第10天时，分析了胎儿小脑形态，但与该受试者相比没有发现显着差异。

项目成果

Iwasaki, H.他7名(4番目): "Molecular characterization of the starfish inositol 1,4,5-trisphosphate receptor and its role during oocyte maturation and fertilization."J.Biol.Chem.. 277. 2763-2772 (2002)

Iwasaki, H. 和其他 7 人（第 4 次）：“海星肌醇 1,4,5-三磷酸受体的分子特征及其在卵母细胞成熟和受精过程中的作用。J.Biol.Chem.. 277. 2763-2772 (2002) ）

Yanagida, E.他8名(4番目): "Functional expression of Ca^<2+> pathways in mouse embryonic stem cells."Cell calcium. (In press). (2004)

Yanagida, E. 和其他 8 人（第 4 期）：“小鼠胚胎干细胞中 Ca^2+ 途径的功能表达”。细胞钙（正在出版）。

吉川文生, 森田規之, 古市貞一: "抗体を利用したタンパクの構造・機能・局在解析"株式会社メディカルドゥ遺伝子医学. 170 (2003)

Fumio Yoshikawa、Noriyuki Morita、Teiichi Furuichi：“使用抗体进行蛋白质的结构、功能和定位分析” Medical Do Genetic Medicine Co., Ltd. 170 (2003)

Bosanac I, Alattia JR, Mal TK, Chan J, Talarico S, Tong FK, Tong KI, Toshikawa F, Furuichi T, Iwai M, Michikawa T, Mikoshiba K, Ikura M.: "Structure of the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor binding core in complex with its ligand"Nature. Dec.12 420(69

Bosanac I, Alattia JR, Mal TK, Chan J, Talarico S, Tong FK, Tong KI, Toshikawa F, Furuichi T, Iwai M, Michikawa T, Mikoshiba K, Ikura M.：“肌醇 1,4,5 的结构

Uchiyama T, Yoshikawa F, Hishida A, Furuichi T, Mikoshiba K.: "A novel recombinant hyperaffinity inositol 1,4,5-trisphosphate (IP(3)) absorbent traps IP(3), resulting in specific inhibition of IP(3)-mediated calcium signaling"J Biol Chem.. 277・10. 8106-81

Uchiyama T、Yoshikawa F、Hishida A、Furuichi T、Mikoshiba K.：“一种新型重组超亲和力肌醇 1,4,5-三磷酸 (IP(3)) 吸收剂捕获 IP(3)，从而特异性抑制 IP(3) ) )介导的钙信号传导”J Biol Chem.. 277・10. 8106-81