小脳脳室帯でのニューロン産生におけるペプチド性ホルモンGhrelinの機能解明

阐明肽激素 Ghrelin 在小脑室区神经元生成中的功能

• 批准号: 14780576
• 负责人: 吉川 文生
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780576/
• 关键词: ペプチドホルモン; Ghrelin; Growthhormone secretagogue receptor; Gタンパク共役型受容体; 小脳; プルキンエ細胞; 脳室帯; ニユーロン産生; Gtowthhomone secretagogue receptor; Gタンパク質共役型受容体; ニューロン産生; 小脳核; ペプチド; ホルモン

ペプチドホルモンGhrelinは、成体では胃、視床下部、胎盤などから分泌され下垂体前葉に作用し成長ホルモン分泌を促進する。GhrelinのレセプターであるGrowth hormone secretagogue receptor (GHS-R)はGタンパク共役型受容体で細胞内Ca2+上昇を誘導する。GHS-Rは成体は下垂体前葉、視床下部、海馬などに発現することが知られているが、胎生期脳での役割は全く不明である。研究代表者は、シグナルシーケンストラップ法、RT-PCR法、In situ hybridization histochemistry法によって、胎生期マウスの脳においてGHS-Rが胎生11〜12日に一過的に小脳脳室帯に限局して発現することを見出した。これは小脳プルキンエ細胞や小脳核ニューロンが産生される時期と場所に一致する。本研究課題は小脳ニューロン産生におけるGhrelinの役割を解明することを目的とする。マウスGHS-R cDNAクローニングに成功した。ウサギポリクローナル抗GHS-R抗体を作製した。ウエスタンブロットによりリコンビナントGHS-Rを特異的に認識することを確認したが、胎生12日マウスの脳では、ウエスタンブロットと免疫組織化学染色で特異的なシグナルは検出できなかった。組織固定法などの条件を試行中である。マウスcDNA由来のGHS-Rを培養細胞に発現させ、カルシウム濃度指示薬Fura-2を用いてGhrelinに対する反応性を確認した。体内埋め込み型の浸透圧ポンプを用いることにより、妊娠10日目のマウス腹腔内にGhrelin (1mM)を持続的に投与したとき、胎児の小脳形態について解析したが・対象と比較して有意な差は見出せなかった。

In adults, Ghrelin is secreted from the stomach, lower optic bed, placenta, and anterior lobe of the pituitary gland. Ghrelin's Growth hormone secretagogue receptor (GHS-R) induces an increase in intracellular Ca2 + in co-active receptors. GHS-R is the adult hypophysis anterior lobe, lower optic bed, hippocampus, and is unknown during the birth period. The research representatives showed that GHS-R could not be detected in the small cells of the 11th to 12th day after birth by the method of RT-PCR, situ hybridization histochemistry, and prenatal stage. The time and place of production of small cells and small nuclei are consistent. This research topic is aimed at clarifying the causes of Ghrelin's disease. The GHS-R cDNA was successful. The anti-GHS-R antibody was detected by ELISA. It was identified by immunohistochemical staining on the 12th day of birth. The organizational fixation method is under trial. The expression of GHS-R cDNA in cultured cells was determined by the presence of Fura-2, an indicator of its activity in Ghrelin. In vivo and in vivo, the penetration pressure of Ghrelin (1mM) in the abdominal cavity on the 10th day of pregnancy was determined by the analysis of fetal morphology.

项目成果

Iwasaki, H.他7名(4番目): "Molecular characterization of the starfish inositol 1,4,5-trisphosphate receptor and its role during oocyte maturation and fertilization."J.Biol.Chem.. 277. 2763-2772 (2002)

Iwasaki, H. 和其他 7 人（第 4 次）：“海星肌醇 1,4,5-三磷酸受体的分子特征及其在卵母细胞成熟和受精过程中的作用。J.Biol.Chem.. 277. 2763-2772 (2002) ）

吉川文生, 森田規之, 古市貞一: "抗体を利用したタンパクの構造・機能・局在解析"株式会社メディカルドゥ遺伝子医学. 170 (2003)

Fumio Yoshikawa、Noriyuki Morita、Teiichi Furuichi：“使用抗体进行蛋白质的结构、功能和定位分析” Medical Do Genetic Medicine Co., Ltd. 170 (2003)

Bosanac I, Alattia JR, Mal TK, Chan J, Talarico S, Tong FK, Tong KI, Toshikawa F, Furuichi T, Iwai M, Michikawa T, Mikoshiba K, Ikura M.: "Structure of the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor binding core in complex with its ligand"Nature. Dec.12 420(69

Bosanac I, Alattia JR, Mal TK, Chan J, Talarico S, Tong FK, Tong KI, Toshikawa F, Furuichi T, Iwai M, Michikawa T, Mikoshiba K, Ikura M.：“肌醇 1,4,5 的结构

Yanagida, E.他8名(4番目): "Functional expression of Ca^<2+> pathways in mouse embryonic stem cells."Cell calcium. (In press). (2004)

Yanagida, E. 和其他 8 人（第 4 期）：“小鼠胚胎干细胞中 Ca^2+ 途径的功能表达”。细胞钙（正在出版）。

Molecular characterization of the starfish inositol 1,4,5-trisphosphate receptor and its role during oocyte maturation and fertilization

• DOI: 10.1074/jbc.m108839200
• 发表时间: 2002-01-25
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Iwasaki, H;Chiba, K;Mikoshiba, K
• 通讯作者: Mikoshiba, K