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血管内皮細胞における流れずり応力の感知と生理機能解析に関する研究

血管内皮细胞流切应力传感及生理功能分析研究

基本信息

批准号：
14780631
负责人：
山本希美子
金额：
$ 2.43万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

P2X4のノックアウトマウスの作製と生理的・病理的意義の解析を以下の順に行った。1)ES細胞への遺伝子導入と相同組替え体の解析ターゲティングベクターをES細胞(TT2)にエレクトロポレーションにより遺伝子導入し、更にG418により遺伝子導入された細胞を選別した。クローン細胞の中からゲノムDNAを抽出し、サザンブロッティングにより相同組替えしたクローン細胞を選別し、5クローンの相同組み替え体を得た。2)キメラマウスの作製ターゲティングベクターを相同組替えしたES細胞のクローンをマウスの初期胚に導入し、得られた胚盤胞を擬妊娠ICRマウスに移植し、キメラマウスを作製した。他のICRマウスと交配させ、ジャームラインに乗っているキメラマウスを選別した。3)ホモ遺伝子欠損マウスの作製キメラマウスとC57/B6を交配させ、生まれたマウスのゲノムをサザンブロッティングにより解析し、ヘテロマウスを選別した。ヘテロマウスの雄と雌を交配させ、ホモ遺伝子欠損、ヘテロ遺伝子欠損、そして野生型マウスを得た。4)表現型の解析得られたマウスの組織・器官の表現型の違いを観察した。テールカフ方及び動脈挿管の直接測定による血圧の測定を行った所、ホモ遺伝子欠損マウスの血圧は収縮期血圧が有意に上昇した。これはCa^<2+>チャネルであるP2X4レセプター遺伝子が欠損した事により、NOによる血管拡張が起きにくくなったためと考えられる。また、in vivoにおける循環器系の観察及び、マウスから単離・培養した血管内皮細胞を用いたin vitroの実験系でP2X4を欠損させたことによる生理的・病理的な意義を検討した。

P2X4 is the most important component of P2 X4. 1)ES cell vector introduction and analysis of the same construct in ES cells (TT2); selection of vector introduction and G418 vector introduction. The DNA of the cells was extracted from the cells, and the DNA of the cells was extracted from the cells of the same group. 2) The same group of ES cells were introduced into the embryonic embryo, and the embryonic embryo cells were transplanted into the embryonic embryo. He is a member of the ICR. 3) The process of the production of The male and female mating patterns are different. The female mating patterns are different. 4)The analysis of the phenotype allows us to observe the differences in the phenotype of tissues and organs. The blood pressure measurement of the blood pressure in the blood pressure measurement of the blood pressure measurement P2X4 The physiological and pathological significance of vascular endothelial cells in vitro and in vivo is discussed.