色素体遺伝子のNEPプロモーターに働く転写因子の単離と機能解析

质体基因NEP启动子转录因子的分离及功能分析

• 批准号: 03J00843
• 负责人: 小林 勇気
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J00843/
• 关键词: 葉緑体; 転写; in vitro転写系; 色素体転写; NEP; PEP

本研究は、植物の色素体に存在する2種類のRNAポリメラーゼPEP(色素体コード色素体RNAポリメラーゼ)とNEP(核コード色素体RNAポリメラーゼ)のうち機能解析が進んでいないNEPについて、その候補であるRpoTを用いたNEPプロモーター認識とNEPによる色素体遺伝子の転写の分子機構を明らかにするため、RpoTの転写活性を生化学的に実証し、さらにNEPプロモーターを認識する新規転写制御因子の探索と同定を目的として解析を行った。本研究は、既に単離し、色素体に局在することを明らかにしたタバコのNsRpoT-B、NsRpoT-Cをもちいて解析を行っている。本年度は、タバコを用いたin vitro転写系にNsRpoT-BとNsRpoT-Cの抗体を添加し、色素体atpB遺伝子転写の変化を検証した。抗体を添加することによって色素体の転写活性が低下する傾向が観察された。この事からNsRpoTは葉緑体においてRNAポリメラーゼとして機能している事が示された。また、タバコin vitro転写系の転写産物による、色素体マイクロアレイを用いた網羅的な検出を行ったが当研究室で開発された培養細胞を用いたin vitro転写系では転写活性が低く大半の遺伝子を明瞭に検出する事はできなかった。さらに、one hybrid法によって新規のNEP転写因子の探索を行い転写因子の候補を得たが、ドメイン検索や生化学的な解析の結果から新規の転写因子は得られなかった。

In this study, there were 2 kinds of RNA fragments in plant pigment bodies.(Pigment) Pigment RNA The molecular mechanism of chromatin gene transcription is clarified by NEP analysis, RpoT activity and biochemical demonstration. The new rules and regulations of NEP are discussed in detail. In this study, the analysis of NsRpoT-B and NsRpoT-C was carried out in the middle of the study. This year, the use of NsRpoT-B and NsRpoT-C antibodies in vitro was investigated. Antibodies are added and the pigment-binding activity tends to decrease. NsRpoT is a chloroplast RNA molecule. The results of the study showed that there was no significant difference in the activity of the cells cultured in vitro, and that there was no significant difference in the activity of the cells cultured in vitro In addition, the one hybrid method is used to explore the new NEP writing factor, and the candidate writing factor is obtained. The result of the analysis of the new NEP writing factor is obtained.