生殖腺で特異的に発現するGSE遺伝子の機能解析

性腺特异性表达的GSE基因的功能分析

• 批准号: 03J51131
• 负责人: 水野 里志
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J51131/
• 关键词: 生殖細胞; 精巣; 卵巣; RNAi; two-hybrid system

GSE(gonad-specific expression gene)遺伝子はZGA期に発現が変化する、精巣および卵巣で特異的に発現する新規遺伝子である。これまでの研究からGSEは、(1)ノーザンブロット解析より生殖腺以外の体細胞系列組織では発現しないこと、(2)精巣ではパキテン期の精母細胞が出現する生後14日目からGSEは発現し始めること、(3)減数分裂期にある精母細胞が存在する分娩時から発現し始めることが示され、生殖細胞の減数分裂に何らかの役割を果たしていることが示唆された(Zhang et al.,2002)。そこで、本研究はGSEが初期発生胚ならびに生殖腺で果たす役割を明らかにすることを目的として、相互作用するタンパク質の検索およびRNAi(RNA-mediated interference)をもちいた遺伝子ノックダウンにより卵巣・精巣における機能解析を行う。1)マウス卵巣cDNAライブラリーによるTwo-hybrid systemを用いたマウスGSEと相互作用を示すタンパク質の探索・lacZ遺伝子を制御しているLexAオペレターに結合領域を持つpGilda lexA vectorにGSEi遺伝子を組み込んだベクターを構築した。・宿主の酵母株(EGY48)にLexAオペレーターに制御されているlacZ遺伝子をコードしているプラスミド(p8op-lacZ),pGilda-GSEおよび卵巣cDNA-librayを組み込んだLexAを含むレポーター遺伝子のAD領域をもつプラスミド(pB42AD)をtransformationし、3種類のプラスミドを持つ酵母株を樹立した。・現在、leucineを欠損した培地で酵母を培養することでGSEと相互作用を持つタンパク質を発現している酵母コロニーのスクリーニングを行っている。2)RNAi(pDECAP)ベクターにGSEcDNAを組み込んだ発現ベクターの構築・pDECAPにGSEの5'領域断片(開始コドンを含む556bp)のinverted repeatのligationを行っている。・鋳型となるプラスミドのinverted repeat配列部位のDNA複製時に鋳型が十字構造(cruciform)をとることで、この部分のdelitionが起こり大腸菌内での複製がうまくいかないことが予測される。このため、宿主となる大腸菌とその培養条件の検討している。

GSE (gonad-specific expression gene) is the result of the ZGA period, and the specific gene is the new regulation of the gene. GSE research and analysis of somatic cell series tissues other than gonadでは発appears しないこと, (2) spermatocytes appear in the 14th day after birth からGSEは発appears and begins, (3) the existence of spermatocytes in the meiosis stage and the beginning of the birth.とがshows され, germ cell のmeiosis に ら か の Servant cut を fruit た し て い る こ と が 见憆 さ れ た (Zhang et al., 2002).そこで、This study is based on GSE's initial stage of embryonic development and gonad removal. Purpose, interaction, quality and interaction, RNA-mediated interference) をもちいた伝子ノックダウンにより Egg壣・精巣における Functional analysis を行う. 1)Massu egg cDNA ライブラリーによるTwo-hybrid SystemをUse the system to interact with each other and show the quality of the system. Explore the lacZ legacy and control the system. vectorにGSEi伝子を组み込んだベクターをconstructedした.・Host yeast strain (EGY48) LexA オペレーターにcontrol されているlacZ 伝子をコードしているプラスミド(p8op-lacZ),pGilda-GSE および egg cDNA- librayを集团み込んだLexAを有むレポーター伝子のAD区をもつプラスミド(pB 42AD)をtransformationし, 3 kinds of yeast strainをestablishmentした.・Currently, leucine is damaged, yeast is cultivated, yeast is cultivated, GSE is interacted with Use the をhold the つタンパク性を発行している yeast コロニーのスクリーニングを行っている. 2)RNAi (pDECAP) GSEcDNA group み込んだ発开ベクターのconstruction・pDECAPにGSEの5' domain fragment (starting コドンをincluding 556bp)のinverted repeatのligationを行っている.・鋳 typeとなるプラスミドのinverted The repeat arrangement site has a cruciform structure during DNA replication. , この PART のdelition が こ り で の replication が う ま く い か な い こ と が さ れ る in the coliform bacteria.このため, host となる coliform and とその culture conditions の検曰している.