枯草菌機能未知必須遺伝子の機能解析

枯草芽孢杆菌中未知功能必需基因的功能分析

• 批准号: 03J61577
• 负责人: 吉村 美香
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61577/
• 关键词: 枯草菌; 機能未知必須遺伝子; グリセロール-3-リン酸; リン脂質合成; 蛋白質間相互作用

機能未知必須遺伝子の機能を解明するために、遺伝学的手法を用いて解析を行った。枯草菌の機能未知必須遺伝子の一つであるyneSについて温度感受性変異株(Ts株)をPCRにより変異を導入した株をスクリーニングすることによって取得した。そして、このTs株を非許容温度で生育させることによって、この変異に対する抑圧変異株を取得した。この抑圧変異の位置を同定した結果、glpD (glycerol-3-phosphate dehydrogenase)への挿入変異によって引き起こされたフレームシフトによって遺伝子が破壊されていることが明らかとなった。glpDは非必須遺伝子で、この破壊株ではグリセロール-3-リン酸(G3P)の細胞内濃度が上昇することが報告されている。従って抑圧変異株ではglpDの細胞内濃度を上昇させることによって温度感受性を抑制していることが考えられた。実際にG3Pもしくはグリセロールを培地に添加することによってTs株は高温での生育が可能となった。しかし、yneSを減少させた場合にはG3Pもしくはグリセロールを添加した場合でも生育できなかった。yneSの機能をG3Pが代替することは不可能であったことからG3P合成後の段階に関与していることが示唆された。G3Pはリン脂質合成経路の最初の基質であることから、yneSはこの経路へ関与していると考えられる。この経路は細胞にとって必須の経路であるが最初の段階で働く酵素だけは現在まで枯草菌を含む多くの生物では明らかとなっていない。^<32>Pを用いてリン脂質のin vivo標識実験を行った結果、yneSのTs株では非許容温度においてリン脂質の合成が最初の段階から停止していた。したがって、これらの結果からもyneSはリン脂質合成経路の最初の段階から関与していることが強く示唆された。なお、本研究の成果に関しては現在論文発表の準備を進めている。

The function of the unknown must be explained, and the method of learning must be analyzed. The function of Bacillus subtilis is unknown, and the gene must be obtained by PCR from temperature-sensitive mutants. The temperature of the plant is not allowed. As a result, glpD (glycerol-3-phosphate dehydrogenase) was introduced into the system. The intracellular concentration of glpD in nonessential genes and plants was reported to increase. The intracellular concentration of glpD was increased in different plants. G3P is the best way to increase productivity. In case of decrease, the number of children will increase. The function of yneS is to replace the G3P. It is impossible to replace the G3P. G3P is the initial matrix of lipid synthesis pathway. The first stage of the circuit is the enzyme stage, and the second stage is the organism stage. <32>P is used in the synthesis of lipids in vivo. The first stage of the lipid synthesis pathway is related to the second stage of lipid synthesis. The results of this study are related to the preparation of the paper.