RNA interference(RNAi)を利用した膵臓癌遺伝子治療法の確立

利用 RNA 干扰 (RNAi) 建立胰腺癌基因治疗

• 批准号: 15790711
• 负责人: 浜田 邦弘
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790711/
• 关键词: RNA interference(RNAi); 膵臓癌; K-ras遺伝子; cDNAマイクロアレイ; RNAi; 遺伝子治療

RNA interference(RNAi)を利用した膵臓癌遺伝子治療の開発にあたり、まず、膵臓癌で高頻度に変異が認められるK-ras遺伝子を治療標的遺伝子の候補とした。当教室で樹立したヒト膵臓癌細胞株YAPCと腹膜高転移株であるYAPC-PDは、K-ras遺伝子のコドン12に変異を認めた。ついでK-ras遺伝子中の翻訳領域を標的とする2種類のsiRNAを設計した。K-ras遺伝子変異を持つヒト膵臓癌細胞株YAPC-PD、AsPC-1、MIAPaCa-2にRNAiFect Reagentを用いてsiRNAを導入した。遺伝子発現抑制効果をRT-PCR法で比較したが、対照として用いたsiRNAが遺伝子発現抑制効果を示したのに対し、K-ras遺伝子を標的とするsiRNAは抑制効果を示さなかった。今回設計したsiRNAは標的とした配列が適切でなかったため、抑制効果を示さなかったと考えられる。これらの実験に並行して、新規治療標的遺伝子の探索のため、教室で樹立したヒト膵臓癌細胞株YAPCと、高腹膜転移株YAPCの遺伝子発現をcDNAマイクロアレイ法で比較した。その結果、33種類の遺伝子が2.5倍以上の発現変動を示した。この中から治療標的遺伝子を選択するため、real-time RT-PCR法、免疫染色法などを用いた膵臓癌臨床検体での遺伝子発現の解析が必要と考えられた。

RNA interference(RNAi) has been used to develop cancer gene therapy, and K-ras genes have been identified as candidates for therapeutic target genes with high frequency. When the tumor cell line YAPC was established in the classroom, YAPC-PD and K-ras genes were identified. Two types of siRNA were designed to target the domain of K-ras. K-ras gene mutation was detected in YAPC-PD, AsPC-1, MIAPaCa-2 cells and RNAiFect Reagent was used to introduce siRNA. RT-PCR method for gene expression inhibition effect comparison, contrast, use of siRNA gene expression inhibition effect, K-ras gene expression target, siRNA gene expression inhibition effect. The target siRNA is designed to be appropriately aligned and inhibited. In order to explore the gene expression of new therapeutic target, we established a new method for cDNA expression of YAPC, a high peritoneal cancer cell line. As a result, 33 species of DNA were found to have more than 2.5 times the occurrence rate. It is necessary to analyze the gene expression of cancer clinical specimens by real-time RT-PCR and immunostaining.