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緑内障の眼圧下降に対する遺伝子治療および細胞移植による新しい治療法の探索

寻找使用基因疗法和细胞移植降低青光眼眼压的新疗法

基本信息

批准号：
15791017
负责人：
垰本慎
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

緑内障は眼圧上昇が視神経に不可逆的な障害を及ぼす疾患である。本疾患における眼圧上昇の主たる原因に房水流出路である隅角線維柱帯における細胞外基質の蓄積が考えられており、ウロキナーゼ(uPA)等それらを分解する線溶系酵素の臨床使用が検討されている。その基礎的実験として培養線維柱帯細胞へのウロキナーゼ遺伝子導入の可能性を検討した。方法は、ヒトuPAの遺伝子配列から特異的プライマーを合成し、購入したヒト細胞株のcDNAライブラリーを鋳型としてPCRを行いヒトuPAのcDNA断片をクローニングした。次にブタ眼球から線維柱帯組織を採取して5%ウシ胎児血清添加F12/DME培地を用いて線維柱帯組織培養を行いく遊走・増殖した細胞を蛍光標識低分子量リポ蛋白(LDL)染色して確認した。TRIzol^【○!R】でtotal RNAを抽出してcDNAを作製し、RT-PCR法でウロキナーゼ遺伝子発現を確認した。全長cDNAを発現ベクターにサブクローニングし、lipofectamine^【○!R】とeffectence^【○!R】を用いて培養ブタ線維柱帯細胞にウロキナーゼ遺伝子を導入した。対照として発現ベクター単独を導入した。ウロキナーゼの発現はenzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)キットを用いて検討した。培養ヒト線維柱帯細胞でウロキナーゼ遺伝子発現がみられた。ウロキナーゼの遺伝子が導入された培養ブタ線維柱帯細胞の培養液からウロキナーゼ(3.5ng/ml)が検出できた。対照ではウロキナーゼは検出されなかった。線維柱帯細胞へのウロキナーゼ遺伝子導入は可能であり、ケミカルトラベクロトミーへと応用できれば開放隅角緑内障の新しい治療法を開発できる可能性を示したことが本研究の実績と考える。

cataract is an irreversible condition of the eye. The main cause of this disease is the accumulation of extracellular matrix in aqueous humor outflow pathway, corner column, extracellular matrix (uPA), etc., and the clinical use of lysosomal enzymes for decomposition. The possibility of gene introduction into cell culture was discussed. Methods cDNA fragments of uPA were synthesized, cloned, and sequenced by PCR. In addition, the human fetal serum was added to 5% of the human fetal tissues. In addition, the human fetal tissues were cultured with F12/DME. In addition, the human fetal tissues were cultured with F12/DME. In addition, the human fetal tissues were cultured with F12/DME. In addition, the human fetal tissues were cultured with F12/DME. TRIzol^【○! Total RNA was extracted and cDNA was produced. RT-PCR was used to confirm the expression of cDNA. Full-length cDNA was developed from lipofectamine. R】とeffectence^【○! R: The cells in the culture column are introduced into the culture medium. For the first time in a long time The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for the detection of the virus. Cultured cells in a linear column are exposed to light. It was introduced into the culture medium of the cells in the culture medium (3.5ng/ml). It's not like you're going to be able to do that. The results of this study demonstrate the possibility of developing a new treatment for open corner cataract.