歯周病関連菌のフォンヴィレブランド因子typeAドメイン類似蛋白質の機能解析

牙周病相关细菌中冯维勒布兰德因子A型结构域蛋白的功能分析

• 批准号: 15791045
• 负责人: 内藤 真理子
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791045/
• 关键词: フォンウィルブラウン因子; Porphyromonas gingivalis; 歯周病関連菌; フォンウィブラウン因子

歯周病関連菌であるPorphyromonas gingivalis(以下P.gingivalis)の染色体中にヒトの血中にある蛋白質の一つで、血小板凝固反応に必須なフォンウィレブラウン因子のタイプAドメイン(vWFA)に予測構造が相似な、von Willebrand Factor Type A domain protein (PgvWFA)と名付けられた遺伝子のmRNAが発現していること昨年確認した。本年度はこのPgvWFAの発現蛋白質の確認と局在を調べる為、PgvWFAの破壊株を作成した。P.gingivalis ATCC 33277(33277株)のPgvWFA遺伝子の5'末端部位にエリスロマイシン耐性遺伝子を相同組み換えにより挿入し、PgvWFAの欠損株を作成した。PgvWFAの欠損はサザンハイブリダイゼーチョンとRT-PCRにて確認した。またPgvWFAのvWFA領域の遺伝子断片をpGEXベクターに挿入し、大腸菌に形質転換しGST-vWFA融合蛋白質を発現、精製した。GST-vWFA融合蛋白質をFCAと混和後ウサギに免疫した。追加免疫後、採血して抗PgvWFA血清を得た。33277株とPgvWFA欠損株の細胞破砕液をSDS-PAGEに展開し、抗PgvWFA血清にてimmunoblottをおこなった。Whole cell lysate, membrane,分泌画分とも調べたが、結果は抗PgvWFA血清に反応するPgvWFA欠損株で欠落する特異的な蛋白質を検出する事は出来なかった。W83株ではPgvWFA遺伝子の隣にはvWFAへ領域を欠落したPgvWFA類似遺伝子が存在する。が、現在進行中の33277株のゲノム解析の結果ではPgvWFAの遺伝子は99%保存されているが、PgvWFA類似遺伝子は欠落している。この事からvWFA領域を保持することはP.gingivalisにとって意義があり、本年の研究で作製した変異株は今後のPgvWFAの研究に大いに役立つと考えられる。

Bacteria associated with perinatal syndrome, Porphyromonas gingivalis (hereinafter P.gingivalis) is a chromosome in the chromosome, a protein in the blood, and a protein in the blood. The small plate solidification reaction must be similar to the predicted structure of the なフォンウィレブラウン factor のタイプA ドメイン (vWFA) Willebrand Factor Type A domain protein (PgvWFA) was confirmed last year. This year, the protein of PgvWFA has been confirmed and adjusted, and the protein of PgvWFA has been produced. P.gingivalis ATCC 33277 (33277 strain) PgvWFA 5' end part にエリスロマイシンresistant 伝子を same group み change えにより inserted し, PgvWFA の deficit strain を made した. PgvWFA's lack of damage and RT-PCR confirmation. The PgvWFA field's remaining sub-fragments were inserted into pGEX, and the Escherichia coli morphological changes were made. The GST-vWFA fusion protein was now and refined. After the GST-vWFA fusion protein is mixed with FCA, it can be immunized. After additional immunization, blood was collected and anti-PgvWFA serum was obtained. The cells of 33277 strains and PgvWFA-deficient strains were developed using SDS-PAGE, and the anti-PgvWFA serum was used for immunoblotting. Whole cell lysate, membrane, secretion draw points, and the results are anti-PgvWFA serum, anti-PgvWFA deficiency strain, specific protein, and anti-PgvWFA serum. W83 strain で は PgvWFA 伝子 の neighbor に は vWFA へ field を lack of fall し た PgvWFA is similar to the remaining 伝子 が existence す る.が, The result of the analysis of 33277 strains of のゲノム currently in progress is 99% saved for PgvWFA, and PgvWFA is similar to の伝子は不了している.この事からvWFA domain をKEEP することはP.gingivalisにとってmeaning があり, this year's research and production will be carried out in the future, and the PgvWFA's research will be carried out in the future.