权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

歯周病関連菌のフォンヴィレブランド因子typeAドメイン類似蛋白質の機能解析

牙周病相关细菌中冯维勒布兰德因子A型结构域蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
15791045
负责人：
内藤真理子
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

歯周病関連菌であるPorphyromonas gingivalis(以下P.gingivalis)の染色体中にヒトの血中にある蛋白質の一つで、血小板凝固反応に必須なフォンウィレブラウン因子のタイプAドメイン(vWFA)に予測構造が相似な、von Willebrand Factor Type A domain protein (PgvWFA)と名付けられた遺伝子のmRNAが発現していること昨年確認した。本年度はこのPgvWFAの発現蛋白質の確認と局在を調べる為、PgvWFAの破壊株を作成した。P.gingivalis ATCC 33277(33277株)のPgvWFA遺伝子の5'末端部位にエリスロマイシン耐性遺伝子を相同組み換えにより挿入し、PgvWFAの欠損株を作成した。PgvWFAの欠損はサザンハイブリダイゼーチョンとRT-PCRにて確認した。またPgvWFAのvWFA領域の遺伝子断片をpGEXベクターに挿入し、大腸菌に形質転換しGST-vWFA融合蛋白質を発現、精製した。GST-vWFA融合蛋白質をFCAと混和後ウサギに免疫した。追加免疫後、採血して抗PgvWFA血清を得た。33277株とPgvWFA欠損株の細胞破砕液をSDS-PAGEに展開し、抗PgvWFA血清にてimmunoblottをおこなった。Whole cell lysate, membrane,分泌画分とも調べたが、結果は抗PgvWFA血清に反応するPgvWFA欠損株で欠落する特異的な蛋白質を検出する事は出来なかった。W83株ではPgvWFA遺伝子の隣にはvWFAへ領域を欠落したPgvWFA類似遺伝子が存在する。が、現在進行中の33277株のゲノム解析の結果ではPgvWFAの遺伝子は99%保存されているが、PgvWFA類似遺伝子は欠落している。この事からvWFA領域を保持することはP.gingivalisにとって意義があり、本年の研究で作製した変異株は今後のPgvWFAの研究に大いに役立つと考えられる。

The predicted structure of Porphyromonas gingivalis(P. gingivalis), A bacterium associated with periodontal disease, is similar to that of von Willebrand Factor Type A domain protein (vWFA), which is a protein in the chromosome of Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis). This year, the identification of PgvWFA protein is in progress, and the production of PgvWFA protein is in progress. P. gingivalis ATCC 33277(33277 strains) was constructed by the same group of PgvWFA resistant strains at the 5'end of PgvWFA gene. PgvWFA's loss is confirmed by RT-PCR. pGEX gene fragments in the vWFA domain were developed and purified from Escherichia coli. GST-vWFA fusion protein FCA after mixing After additional immunization, blood samples were collected to obtain anti-PgvWFA serum. 33277 strain PgvWFA deficient strain cell lysate SDS-PAGE development, anti-PgvWFA serum immunoblott Whole cell lysate, membrane, secretion of PgvWFA serum, PgvWFA deficient strain, and specific protein. The W83 strain has a PgvWFA gene and a PgvWFA-like gene. The results of analysis of 33277 strains in progress show that 99% of PgvWFA genes are preserved, while PgvWFA similar genes are not preserved. This year's research is about the future of PgvWFA.