Orthotopic肺癌モデルの開発 PETイメ-ジングによる検証と放射線腫瘍学的特性

原位肺癌模型的开发 通过 PET 成像和放射肿瘤学特性进行验证

• 批准号: 04F04602
• 负责人: 康 芸 (2006)
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04602/
• 关键词: human lung cancer; A549 cell line; SQ5 cell line; orthotopic tumor model; immunohistochemical staining; Bromodeoxyuridine; nude mouse; subcutaneous tumor model; FDG; γ-counter; SO5 cell line

目的:ヌードマウスを用いたOrthotopicヒト肺癌モデルの確立、Orthotopicヒト肺癌の生物特性はとマウス皮下に形成しているヒト肺癌の生物特性と比較。研究材料:ヒト肺腺癌A549細胞及び扁平上皮癌SQ5細胞を5%αMEM mediumで培養した。7から9週齢のBalb/cヌードマウス(チャールズリバー社)を用いた。Bromodeoxyuridine (BrdUrd), Propidium Iodide, Protease (Sigma)。マウス抗BrdUrd抗体、抗マウスFITC結合二次抗体。研究方法:1)orthotopicヒト肺癌腫瘍及びの皮下ヒト肺癌腫瘍をそれぞれ作製し、マウスを解剖する前20分に、BrdUrd (60mg/kg)を腹腔内に注射し、肺腫瘍及び皮下腫瘍を回収した。サンプルをフォルマリンで固定し、5μmにカットし、スライドを作成にした。2)スライドをHE染色し、腫瘍の大きさ、形態や分布などを観察した。スライドを脱パラフィンと水和し、Proteaseで処理した。DNAを2Nの塩酸で処理し、ホウ酸で中和した。馬血清でブロックし、マウス抗BrdUrd抗体を結合させた。さらにFITC結合抗マウス二次抗体を結合させた。細胞核をPropidium Iodideで染色し、スライドを蛍光顕微鏡で観察した。BrdUrd陽性細胞はDNAを合成している細胞であり、増殖していると判断し、腫瘍の増殖をカウントした。結果:HE染色したスライドでは、Orthotopic肺腫瘍は直径100μlから5mmまで大きさが様々でした。ヒト肺腺癌A549のOrthotopic腫瘍は不完全な腺組織の形態を形成し、主に肺組織の周辺に分布した。扁平上皮癌SQ5のOrthotopic腫瘍は主に末梢気管支から形成され、中心壊死が顕著でした。Orthotopicヒト肺腫瘍ではBrdUrd陽性細胞は何箇所に集中して分布し、一視野あたり平均28個BrdUrd陽性細胞があった。皮下ヒト肺腫瘍ではBrdUrd陽性細胞は分散に分布し、一視野あたり平均22個BrdUrd陽性細胞があった。以上によりOrthotopic肺腫瘍モデルはヒト肺癌の発生及び増殖などの生理状態をより反映していることが予想される。

Objective: To establish and compare the biological characteristics of orthotopic lung cancer and its subcutaneous formation. Materials: Lung adenocarcinoma A549 cells and squamous cell carcinoma SQ5 cells were cultured in 5%αMEM medium. 7. Balb/c Bromodeoxyuridine (BrdUrd), Propidium Iodide, Protease (Sigma)。Anti-BrdUrd antibody, anti-BrdUrd FITC conjugated secondary antibody Methods:1)Orthotopic lung cancer and subcutaneous lung cancer were treated by intraperitoneal injection of BrdUrd (60mg/kg) at the first 20 minutes after dissection, and lung cancer and subcutaneous lung cancer were treated by subcutaneous injection. 5μm high temperature 2) HE staining, tumor size, morphology and distribution were observed. The water is warm and the protection is reasonable. DNA 2N is a natural and neutral protein. Horse serum is combined with anti-BrdUrd antibodies. FITC conjugated secondary antibody The nucleus was stained with Propidium Iodide and examined by light microscopy. BrdUrd positive cells are able to synthesize DNA, proliferate, and proliferate. Results:HE staining showed that the diameter of orthotopic lung cancer was 100μl and 5mm, and the diameter of Orthotopic lung cancer was 100μl and 5 mm. A549 orthoropic lung cancer is characterized by incomplete glandular tissue morphology and circumferential distribution of the main lung tissue. Squamous cell carcinoma SQ5 and Orthotopic tumors are mainly formed by peripheral vascular branches and central death. The BrdUrd positive cells were concentrated in all areas of the orthoropic lung cancer, with an average of 28 BrdUrd positive cells in one field of vision. The BrdUrd positive cells were scattered and distributed in subcutaneous lung cancer. There were 22 BrdUrd positive cells in one field of vision. The above results reflect the physiological state of lung cancer development and growth.