葉緑体の無細胞スプライシング系の開発

叶绿体无细胞剪接系统的开发

• 批准号: 04J06115
• 负责人: 長谷川 桂子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J06115/
• 关键词: スプライシング; 葉緑体; 無細胞系(in vitro系); タバコ; グループIIイントロン; グループIイントロン; セルフスプライシング

前年度に引き続き、グループIIイントロンに着目して、タバコ葉緑体無細胞(in vitro)スプライシング系の開発に主眼をおき研究を進めた。前年度の成果により、タバコの葉緑体を用いた無細胞スプライシング系の調製、活性の検出に成功していたため、本年度はさらにスプライシング効率を高めるための条件検討、および、in vitro系を用いてスプライシング効率に影響を与えるシス配列の同定を行った。1、葉緑体抽出液の調製とスプライシング系の開発および改良葉緑体mRNAのスプライシング活性を指標として、タバコの育成条件、調製条件の検討を行い、スプライシング活性を安定させることに成功した。さらにin vitro反応時の塩濃度、基質濃度、反応時間等、様々な条件の検討によって、2種類の遺伝子mRNAについて、効率よくスプライシングされる反応条件を決めた。2、イントロンの保存配列の機能ドメインの同定イントロン配列中の配列を改変した前駆体mRNAをin vitro系で反応させることによってスプライシングに関わる配列を同定する事ができた。これを2種類のmRNAで比較したところ、同一種類のシス配列にも関わらず、スプライシング効率への影響が両者で異なっていることが判明した。この結果はスプライシング反応に関わるタンパク質因子の種類が異なっていることを示唆している。3、イントロン配列に結合する蛋白質因子を検出基質RNAに結合する因子の検出を試みたが、現在までのところ安定した結果は得られていない。

In the past year, the development of chloroplast cell-free system has been studied. The results of the previous year were successful in the modulation and activity of cell-free chloroplasts. The results of this year were high in the modulation and activity of cell-free chloroplasts. The results of this year were similar to those of the previous year in the modulation and activity of cell-free chloroplasts. 1. The development of chloroplast extract modulation and regulation system and the improvement of chloroplast mRNA modulation activity index, the cultivation conditions of chloroplast, the study of modulation conditions, the stability of chloroplast modulation activity In addition, in vitro reaction time, the concentration of substrate, reaction time, etc., the conditions of reaction, the concentration of 2 kinds of gene mRNA, the efficiency of reaction conditions, etc. 2. The sequences in the identical sequence of the functional identifiers of the preserved sequences of the sequences The differences between the two kinds of mRNA were identified. The results show that the quality factors of different species are different. 3. The protein factor that binds to the matrix RNA is detected and the stability of the protein factor is determined.