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メラノーマにおけるMITF-Mを用いた抗腫瘍効果の検討及び色素上皮由来因子の関与

使用 MITF-M 检查黑色素瘤的抗肿瘤效果以及色素上皮衍生因子的参与

基本信息

批准号：
16790632
负责人：
北村玲子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790632/
关键词：
メラノサイト MITF メラノーマ

项目摘要

背景小眼球症関連転写因子MITFはメラノサイトと網膜色素上皮細胞の両方の分化に影響する遺伝子の代表であり、なかでもMITF-Mアイソフォームはメラノサイトおよびメラノーマのみで特異的に発現されている。さらに近年MITFはメラノサイト及びメラノーマにおいて、アポトーシス抑制因子であるBcl-2を介して細胞増殖に関わっていることがわかってきた。我々はメラノーマにおけるMITF-Mの機能に着目し、次にMITF-Mの発現を阻害し細胞増殖との関わりを検討した。1,リコンビナント融合蛋白の作製MITF-MのcDNAをRT-PCRにて増幅し、これをもとに細胞質内に大量の蛋白を効率よく導入するためのHIV-TATドメインとMITF-Mおよびdominant negative MITF-Mの融合蛋白をコードするプラスミドを作成した。続いて大腸菌を用いて融合蛋白を大量に産生して精製した。2,メラノーマに対する効果の検討次にin vitroでのB16melanoma細胞株におけるMITF-M蛋白およびdominant negative MITF-M蛋白の影響を検討した。具体的にはB16メラノーマ細胞の培養液中に作製したMITF-M蛋白およびdominant negative MITF-M蛋白を添加し、cell viability及びメラニン産生を検討したところ、viabilityに明らかな差はみられなかったが、MITF-M蛋白導入した細胞ではメラニン産生が多く見られる細胞が散見され、dominant negative MITF-M蛋白導入した細胞ではメラニン産生の低下した細胞が多くみられた。

Background Microphthalmosis-associated transcription factor MITF affects the differentiation of retinal pigment epithelial cells (RPE), and mitf-associated transcription factor MITF-M is responsible for the development of RPE cells. In recent years, MITF has been involved in cell proliferation. The function of MITF-M is to prevent the development of MITF-M and to prevent cell proliferation. 1. Production of HIV-TAT fusion protein MITF-M cDNA by RT-PCR amplification, transcription and transcription of a large number of proteins into the cytoplasm, efficient introduction of HIV-TAT fusion protein MITF-M and dominant-negative MITF-M fusion protein production. The fusion protein was produced in large quantities and refined by Escherichia coli. 2. To investigate the effects of mitf-M protein and dominant-negative mitf-M protein on B16melanoma cell line in vitro. In particular, MITF-M protein and dominant-negative MITF-M protein were produced in the culture medium of B16 cells, cell viability and production of mitF-M protein were investigated. The dominant negative MITF-M protein is introduced into the cells, and the cells that produce it are more sensitive.