血清中の癌特異的遺伝子異常及びプロテオミクスを利用した新しい肺癌再発予測法の開発

开发利用血清和蛋白质组学中癌症特异性遗传异常预测肺癌复发的新方法

• 批准号: 16790796
• 负责人: 橋本 毅久
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790796/
• 关键词: 非小細胞肺癌; 遣伝子異常; メチル化; 微小転移; 再発; 予後; 肺癌; 遺伝子異常; 再発予測

1)methylation-specific PCR(MS-PCR)法の検出感度についての検討方法:陽性コントロールの希釈系列を作成しp16遺伝子プロモーター領域のprimerを用いてMS-PCRをおこなった。結果:MS-PCR法はnested PCRとすることによって陽性コントロールの10^<-5>以上の検出感度にすることが可能であった。2)原発巣腫瘍組織におけるメチル化の検出対象・方法:連続的に切除された非小細胞肺癌83例の凍結保存された正常肺、腫瘍からそれぞれDNAを抽出し、sodium bisulfite処理を加えた後、MS-PCR法を試みた。結果:腫瘍組織におけるプロモーター領域のメチル化は83例中39例(47%)に認められた。3)血清中からのメチル化DNAの検出対象・方法:原発巣腫瘍組織においてメチル化が認められた39例を対象とした。それぞれの症例の血清中からDNAを抽出して同様にsodium bisulfite処理を加えた後、MS-PCR法を試みた。結果:39例中14例(36%)において血清中から腫瘍組織と同様のメチル化DNAが検出された。4)血清中からメチル化DNAが検出された症例の予後、臨床病理学的因子の検討結果:血清中のメチル化DNA陽性14症例と陰性25症例の間で喫煙、病理病期、組織型、分化度などの臨床病理学的因子の違いの有無を検討したが、陽性症例はCEAが高値であった。再発は陽性6例(42.8%)と陰性4例(16%)に認め、また遠隔転移を陽性4例(28.6%)、陰性1例(4%)に認めた。5)まとめ・今後メチル化DNAを指標としたnested MS-PCR法は簡便であり、且つ検出感度も高かった。血清中からメチル化DNAが検出された症例はCEAが高く、再発・遠隔転移が多い傾向を認めた。今後は更に多種類の遺伝子での検索を検討したい。また血清蛋白での検索は更なる検討が必要である。

1) Detection sensitivity of methylation-specific PCR(MS-PCR) Method: Positive PCR sequence was created and p16 PCR sequence was used in MS-PCR. Results:MS-PCR method can detect more than 10% of the positive PCR samples<-5>. 2)Methods: 83 cases of non-small cell lung cancer were frozen and preserved, and DNA was extracted from normal lung and tumor tissues. MS-PCR method was used to detect DNA after sodium bisulfite treatment. Results: 39 cases (47%) of the 83 cases of tumor tissue were identified as tumor tissue. 3)Methods: 39 cases were detected in the original tumor tissue. DNA was extracted from the serum of the patients and treated with sodium bisulfite. Results: 14 of 39 cases (36%) were found to have the same DNA as those in tumor tissue. 4)The results showed that 14 cases were positive for CEA and 25 cases were negative for CEA, and smoking consumption, pathological stage, histological type, differentiation degree, and the presence or absence of CEA in positive cases. 6 cases (42.8%) were positive and 4 cases (16%) were negative. 4 cases (28.6%) were positive and 1 case (4%) negative. 5) The MS-PCR method is simple and sensitive. Serum CEA levels increased, serum CEA levels increased, serum CEA levels increased, In the future, more and more kinds of genetic resources will be explored. The serum protein was detected and changed.