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"Deliver-body"システムによるタンパク質の細胞内導入

使用“Deliver-body”系统将蛋白质引入细胞内

基本信息

批准号：
16700353
负责人：
三重正和
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16700353/
关键词：
抗体 PTD タンパク質導入 NeuroD2 neuroD2 TAT

项目摘要

本研究では、細胞膜透過能を有するTAT-PTDと抗体結合能を有するプロテインAのBドメインを融合したタンパク質(TAT-B2C)による抗体の細胞内への導入技術を基に、新たなタンパク質の細胞内導入法の開発を目的とする。前年度、神経細胞分化誘導を目的としてdeliver-bodyを用いて細胞内に導入するために精製を行った転写因子NeuroD2タンパク質が膜透過能を有する事を見出した。本年度は、この転写因子NeuroD2の細胞膜透過能、並びにその分化誘導能について検討を行った。始めにNeuroD2内に存在する膜透過配列を明らかにするためNeuroD2内の塩基性に富んだ配列を検索し、その配列を欠損したNeuroD2タンパク質を作製した。作製したタンパク質を蛍光標識し細胞に添加したところ、100からIl5番目に存在する核移行シグナルが膜透過能に関与している事が示唆された。更にTAT-PTDの代わりにプロテインAのBドメインにこの配列を融合し、その膜透過能を検討したところTAT-PTD同様に膜透過能を有することが明らかになった。次に導入されたNeuroD2タンパク質が神経細胞分化を誘導可能であるかを細胞の形態変化とRT-PCRによる遺伝子発現解析により検討した。その結果、細胞内に導入されたNeuroD2タンパク質が神経細胞分化を誘導することを明らかにした。これらの結果から、転写因子NeuroD2はdeliver bodyシステムを用いなくても細胞内に導入することが可能であり、更には細胞分化をも誘導可能であることが明らかになった。

In this study, the TAT-PTD antibody binding was detected through the cell membrane permeation, and the fusion protein (TAT-B2C) was detected. The antibody was introduced into the technical base of the technique, and the new method was used for the purpose of starting the procedure. In the previous year, the goal of cell differentiation in deliver-body was to use the intracellular concentration of the drug to write the factor NeuroD2. Through the membrane, it was possible to get the product out of the cell. This year, we write the factor NeuroD2 membrane permeation, and we will be able to improve the performance of the system. In the beginning, there is a thin film in the NeuroD2. It is clear that the basic information in the NeuroD2 is rich, and that the configuration is not available. In this case, the NeuroD2 information is not available. Make sure that you are aware of the fact that you have added the information, and that there is an information on the transfer of nuclear energy through the membrane of the Il5. In order to improve the performance of the TAT-PTD system, you can improve the performance of the TAT-PTD by using the same membrane. The second time you enter the NeuroD2 system, you may be able to change the shape of the cell. You may be able to analyze the data from the RT-PCR. According to the results of the experiment, the cellular differentiation of NeuroD2 cells leads to the induction of cellular differentiation. The results of this study show that the factors NeuroD2, deliver body, and so on may be affected by the presence of intracellular DNA in the cells, and the cellular differentiation may be affected by the change of cell differentiation.