脂肪族炭素ハロゲン化に関わる新規ハロゲン化酵素の機能研究

新型卤化酶参与脂肪族碳卤化的功能研究

• 批准号: 16710159
• 负责人: 大塚 みゆき
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Tamagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16710159/
• 关键词: helogenase; neocarzilin; biosynthesis; expression; halogenase; gene disruption

ネオカルジリン生合成遺伝子クラスター中に存在する新規ハロゲン化酵素遺伝子の機能同定を目的として、本遺伝子の大量発現系の構築を行った。前年度までに様々なタグ融合タンパクとしての発現や大腸菌ホストの検討、誘導条件の検討を行ったが芳しい結果は得られなかった。今年度は異種放線菌発現系の構築を試みたが、こちらも芳しい結果は得られなかった。唯一、大腸菌発現系でシャペロンと共発現した場合に目的タンパク質が一部可溶性画分に分画されることを見出した。また、不溶化した発現タンパクのリフォールディングも試み、一部のタンパクが可溶化することを見いだした。調製した発現ハロゲン化酵素と種々基質を反応し、基質特異性を検討した。基質候補化合物であるデクロロネオカルジリン、5-フェニル3,5-ジオキソペンタン酸を合成し、発現したハロゲン化酵素、フラビン還元酵素とインキュベートし、反応物をHPLCで分析した。また1,3-アセトンジカルボン酸、ジメチル1,3-アセトンジカルボン酸およびL-トリプトファンについても同様に検討した。その結果いずれの基質を用いた場合も反応前と反応後で有意な差は認められず、これらはハロゲン化酵素に基質として認識されないことが示唆された。もっとも有力な気質候補化合物と考えられた(12S, 6E, 8E, 10E)12-methyl-3,5-dioxo-6,8,10-tetradecatrienoic acidの合成も検討しているが、現段階で全合成には至っていない。しかしもう一つの有力な基質候補化合物であるデクロロネオカルジリンが基質として認識されなかったことから、12-methyl-3,5-dioxo-6,8,10-tetradecatrienoic acidが本来のハロゲン化酵素の基質である可能性が高いと考えられる。

There are some new regulations in the production of synthetic products. Enzyme enzymes can be used for the same purpose, and a large number of users are in line with each other. In the previous year, it was found that there was a significant increase in the number of bacteria caused by bacteria in the previous year, and the results showed that the results were satisfactory. This year, several kinds of actinomycetes were tested and the results showed good results. The only thing that can be seen is that a soluble picture is divided into different parts of a soluble picture. Do not dissolve, do not dissolve. In this experiment, several kinds of enzymes have been detected, such as anti-enzyme and anti-enzyme. The compounds of phenotypic acid synthesis, enzyme synthesis, zymogenase synthesis, HPLC analysis and reverse enzyme analysis were studied. I don't know if it's sour. I don't know. The results showed that the general information system was used to indicate that there was a significant difference between the two before and after the treatment. The compounds (12s, 6e, 8e, 10e) were synthesized by tetradecatrienoic acid (12s, 6e, 8e, 10e). One potent compound, one potent acid compound, one potent compound, the other one, the compound, the enzyme, the enzyme.

项目成果

Cloning, sequencing, and functional analysis of an iterative type I polyketide synthase gene cluster for biosynthesis of the antitumor chlorinated polyenone neocarzilin in "Streptomyces carzinostaticus"

• DOI: 10.1128/aac.48.9.3468-3476.2004
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY
• 影响因子: 4.9
• 作者: Otsuka, M;Ichinose, K;Ebizuka, Y
• 通讯作者: Ebizuka, Y