ムチン型糖転移酵素遺伝子の単離と解析

粘蛋白型糖基转移酶基因的分离与分析

• 批准号: 17790233
• 负责人: 橋本 光義
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790233/
• 关键词: 糖転移酵素; ムチン; acetylglucosaminyltransferase; 免疫染色; ノーザンプロット; RACE

マウスcore2 β1,6-N-acetylglucosaminyltransferase mucus type(C2GnT-M)遺伝子をクローニングするために、ヒトC2GnT-M遺伝子のcDNA塩基配列を用いてデータベース検索を行った。次に、マウスの大腸からmRNAを抽出し、RACE法を用いてC2GnT-M遺伝子のcDNAを取得した。5'-RACEでは1種類、3'-RACEでは2種類のcDNA断片が得られた。マウスC2GnT-MのmRNAは2種類あると考えられ、その完全長塩基配列は約4.3kbおよび2.25kbであった。DNA塩基配列との比較により、C2GnT-M遺伝子は3つのexonで構成され、そのopen reading frameはexon3に位置しており、2つの異なるポリA付加部位を使用していることが示唆された。RACEプロダクトの一部をプローブにしてノーザンプロット法を行ったところ、2本のバンドが確認され、大腸や小腸、胃に強い発現が認められた。次に、合成ペプチドを用いてポリクローナル抗体の作製を行った。抗体の検定は、ウエスタンブロット法を用いて行った。C2GnT-Mの触媒領域をPCRクローニングにより発現ベクターに組み込み、Panc1細胞にトランスフェクションしてFLAGタグとの融合タンパク質を発現させ、抗体の特異性を確認した。免疫染色によりC2GnT-Mは、大腸の杯細胞、小腸の杯細胞やパネート細胞、ブルンナー腺、胃の腺窩上皮、副細胞、幽門腺に発現が認められた。C2GnT-Mは、MUC2やMUC5AC、MUC6などの分泌型ムチンを分泌する細胞に発現していることが示唆された。以上の内容は英語論文にまとめ現在投稿中である。また、ヒト大腸癌におけるC2GnT-Mの発現を免疫染色により検討したところ、分化型腺癌では発現が低下しているが粘液癌には強い発現が認められた。

C2 GnT-M gene is used for cDNA gene mapping of β1,6-N-acetylglucosamyltransferase mucus type(C2 GnT-M) gene. C2GnT-M cDNA was extracted by RACE. 5'-RACE 1 species, 3'-RACE 2 species cDNA fragments were obtained. C2GnT-M mRNA is about 4.3kb long. DNA base alignment and comparison, C2GnT-M gene exon 3, exon 3, exon 2, exon 3, exon 3, exon 2, exon 3, exon 2, exon 3, exon 3, exon 2, exon 3, exon 2, exon 3, exon 3, exon 2, exon 3, exon 4, ex RACE is the first part of the program to be implemented in the large intestine, small intestine and stomach. Second, the synthesis of anti-tumor antibody production Antibodies are fixed, and they are used in different ways. C2GnT-M catalytic domain PCR detection, Panc1 cell PCR detection, FLAG detection, antibody specificity confirmation C2GnT-M, goblet cells of the large intestine, goblet cells of the small intestine, epithelial cells of the gastric fossa, accessory cells and pyloric glands were identified by immunostaining. C2GnT-M, MUC2, MUC5AC, MUC6, and other secretory cells are expressed in the medium. The above contents are in English papers. The expression of C2GnT-M in colorectal carcinoma was detected by immunostaining, and the expression of differentiated adenocarcinoma was detected by immunostaining.