RNAi法を用いたヒトがんの増殖、進展の制御の研究

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究では、RNA interference (RNAi、RNA干渉)法を用いて、悪性黒色腫に対するBRAF、卵巣癌に対するAURKAの機能抑制を行い、癌細胞に及ぼす影響をin vitro、in vivoで検討した。さらに、ノックダウンと各種抗癌剤や特定の発がん経路に特異的に作用する低分子量化合物などを併用することによる腫瘍細胞増殖への影響を調べ、新たながん治療への応用の可能性を検討する。1)BRAF遺伝子ノックダウンによる機能解明悪性黒色腫におけるBRAF遺伝子の機能解明研究では、in vitroの系では、BRAFのノックダウンによって下流のシグナル伝達分子であるMEK、ERKのリン酸化や細胞増殖には変化が認めない結果を得た。しかし、in vivoでの検討では、BRAF蛋白の発現抑制効果について、細胞増殖の抑制と血管新生の抑制を介した腫瘍増殖抑制、VEGF蛋白の発現抑制が認められた。2)AURKA遺伝子ノックダウンによる細胞増殖抑制の検討AURKAは膵癌、卵巣癌などで高発現しており、膵癌ではノックダウンにより増殖が抑制されるなど、新たな治療戦略の候補となっている。卵巣癌においてAURKAを介した治療の可能性を検討するため、pSUPER・retro+GFPベクターを用いてstableなAURKAノックダウンクローンを作製し、in vitro、in vivoでの細胞増殖抑制効果が認められた。更に、正常細胞におけるAURKAの増殖抑制、アポトーシス誘導が極めて低い結果から、AURKA単独で卵巣癌治療効果があると考える。抗癌剤シスプラチンとの併用による更なる効果も得られ副作用を極力軽減させた治療可能性を示唆した。これから結果をまとめ、第65回日本癌学会と2006年日本分子生物学会で発表し、現在は論文投稿中である。3)ES細胞におけるshRNAシステム構築と動物モデルの作製これまで行ってきたRNAi効果による遺伝子機能解析をさらに応用するために、RNAi効果をもたらすHPRT-shRNAシステムをES細胞に導入してshRNA細胞株を樹立し、遺伝子ノックダウン動物モデルの作製を進めている。