マウスおよびヒト加齢卵子におけるオーロラ蛋白およびミトコンドリアの機能変化の解析

小鼠和人类老化卵母细胞中极光蛋白和线粒体功能变化的分析

• 批准号: 17791099
• 负责人: 渡邉 誠二
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791099/
• 关键词: 卵子; 精子; 染色体異常; オーロラ蛋白; チューブリン; 染色体; 細胞骨格; 加齢; 微小管

【実験】誘発排卵時に得られる未成熟卵子は体外培養することでMII期へと移行し成熟卵子となる。このヒトIVM卵子には高頻度に姉妹染色分体早期分離(PSC)が生じるとともに受精後の胚盤胞発生率が低いという加齢卵子と共通の特徴がみられる。このことから我々はIVM卵子を加齢卵子の救済法研究のモデルとして実験利用し、GV期にタキソール処理することで上述の加齢卵子と共通の特徴が改善されることを既に報告した。今回はタキソール処理したIVM卵子において細胞骨格の構成要素である微小管及び染色体の配列と分配に関わるオーロラ蛋白の分布を蛍光免疫染色法により検索した。採卵時に得られたGV卵子を0.05μg/m1タキソールで2時間処理し、処理直後及び体外培養後のMII期にホルマリン固定した。PBSで卵子を洗浄後、一次抗体にマウス抗チューブリン抗体及びウサギ抗オーロラA抗体を、二次抗体にローダミン標識抗マウス抗体及びFITC標識抗ウサギ抗体を用いて免疫染色を行った。タキソール未処理群を対照とした。また抗体の有効性を確認するためマウスGV期及びMII卵子をポジティブコントロールに用いた。【結果】ヒトGV期において未処理群ではチューブリンが表層に分布したのに対しタキソール処理群では細胞質全体に分布する傾向があった。ヒトMII期では未処理及び処理群共にチューブリンは紡錘体を形成するとともに表層に分布した。マウスGV期及びMII期においてもヒト卵子対照群と同様の傾向であった。一方、オーロラ蛋白はヒト卵子では核への局在が認められなかったが、マウスではGV期及びMII期共にDNAに強く局在していた。【結論】タキソール処理によりチューブリンが細胞質全体に分布することでPSCが抑制されている可能性が示唆された。ヒト卵子ではオーロラA分布がマウスと異なる可能性が示唆されたが、染色条件などの影響も考えられた。

When ovulation is induced, immature eggs are cultured in vitro, and mature eggs migrate to MII stage. The high frequency of IVM egg development and early chromatid separation (PSC) results in low embryo development rate after fertilization and common characteristics of IVM egg development. This paper reports on the improvement of the common characteristics of the IVM eggs and their rescue methods. IVM egg cells are processed by microtubule and chromosome alignment and distribution. GV eggs were collected at 0.05μg/m1 for 2 hours, then fixed at MII stage after treatment and in vitro culture. After washing eggs with PBS, primary antibodies are labeled with anti-virus antibodies and anti-virus antibodies. Secondary antibodies are labeled with anti-virus antibodies and FITC antibodies. A good idea. The antibody has been identified in the GV phase and MII phase. [Results] The distribution of cytoplasm in the untreated group tended to be higher than that in the untreated group During the MII period, spindles were formed and distributed on the surface layer between untreated and treated groups. The GV and MII stages are similar. A side, a side. [Conclusion] The possibility of PSC inhibition is demonstrated by the distribution of PSC in the cytoplasm. The distribution of eggs is different, and the staining conditions are different.

项目成果

核置換卵子の染色体異常

核置换后卵母细胞染色体异常

• 发表时间: 2007
• 期刊: 日本生殖医療エンジニアリング研究会 2・1
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二
• 通讯作者: 渡邉 誠二

核置換卵子の活性化と染色体分配

核替代卵母细胞激活和染色体分离

• 发表时间: 2008
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二

核置換卵子の発生と染色体分配

具有核置换和染色体分离的卵母细胞发育

• 发表时间: 2008
• 期刊: 産婦人科の実際 (印刷中)
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二

タキソール処理IVM卵子の染色体と発生

紫杉醇处理的 IVM 卵的染色体和发育

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二;渡邉誠二;渡邉誠二
• 通讯作者: 渡邉誠二

Studies on the mechanism of the oocyte aging

卵母细胞衰老机制的研究

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐藤克彦;和田義之;五十嵐匠;高橋悟;渡邉誠二;渡邉 誠二;渡邉誠二;渡邉誠二;渡邉誠二;Seiji Watanabe
• 通讯作者: Seiji Watanabe