高感度定量的プロテオーム解析を用いた糖尿病網膜症の病態解明

今年度は安定同位体による質量分析器を用いたプロテオーム解析をより、高感度、再現性を目標に研究を行った。安定同位体として、広島大学大学院理学研究科泉俊輔氏から提供を受けたLys修飾試薬3H4NBASに加え、市販されているNBS試薬(SHIMADZU)を用いて研究を行った。(1)血漿蛋白質についてTransthyretin、a1-antitrypsin、Hemopexin、Apolpopr0teinA-1、a1-antichymotrypsinなどの血清蛋白質は糖尿病網膜症でのピーク強度が黄斑円孔のピーク強度に比べ約20倍であった。これらの蛋白質はピーク強度比より糖尿病網膜症において黄斑円孔に比べ約20倍の量で存在していることが示された。2次元電気泳動でのプロテオーム解析の結果と一致した。(2)硝子体特有の蛋白質Prostaglandin-D2 synthase、nterphotoreceptor retinoid binding-protein、Plasma glutathione peroxidaseは糖尿病網膜症と黄斑円孔では同程度のピーク強度であり、これらの蛋白質は糖尿病網膜症、黄斑円孔とも同量存在していることが示された。2次元電気泳動でのプロテオーム解析の結果と一致した。(3)新たな蛋白質の同定これまでのプロテオーム解析では同定できなかったVascular endothelial growth factor(VEGF)、Fibroblast growth factor(FGF)を糖尿病網膜症で同定した。VEGF、FGFは糖尿病網膜症の発症、増悪に強く関与しているとされている。しかし黄斑円孔では同定できず、ピーク強度の比較ができなかった。微量な蛋白質の定量的な測定を目標とし、2次元電気泳動を用いた方法より、感度を上昇することが可能であった。しかし全ての蛋白質が定量化できず、現時点で臨床応用には難しいと思われる。

今年度は安定同位体による質量分析器を用いたプロテオーム解析をより、高感度、再現性を目標に研究を行った。安定同位体として、広島大学大学院理学研究科泉俊輔氏から提供を受けたLys修飾試薬3H4NBASに加え、市販されているNBS試薬(SHIMADZU)を用いて研究を行った。(1)血漿蛋白質についてTransthyretin、a1-antitrypsin、Hemopexin、Apolpopr0teinA-1、a1-antichymotrypsinなどの血清蛋白質は糖尿病網膜症でのピーク強度が黄斑円孔のピーク強度に比べ約20倍であった。これらの蛋白質はピーク強度比より糖尿病網膜症において黄斑円孔に比べ約20倍の量で存在していることが示された。2次元電気泳動でのプロテオーム解析の結果と一致した。(2)硝子体特有の蛋白質Prostaglandin-D2 synthase、nterphotoreceptor retinoid binding-protein、Plasma glutathione peroxidaseは糖尿病網膜症と黄斑円孔では同程度のピーク強度であり、これらの蛋白質は糖尿病網膜症、黄斑円孔とも同量存在していることが示された。2次元電気泳動でのプロテオーム解析の結果と一致した。(3)新たな蛋白質の同定これまでのプロテオーム解析では同定できなかったVascular endothelial growth factor(VEGF)、Fibroblast growth factor(FGF)を糖尿病網膜症で同定した。VEGF、FGFは糖尿病網膜症の発症、増悪に強く関与しているとされている。しかし黄斑円孔では同定できず、ピーク強度の比較ができなかった。微量な蛋白質の定量的な測定を目標とし、2次元電気泳動を用いた方法より、感度を上昇することが可能であった。しかし全ての蛋白質が定量化できず、現時点で臨床応用には難しいと思われる。