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ファージディスプレイ法を用いた機能性分子複合型ハイドロキシアパタイトの創製

利用噬菌体展示法制备功能性分子复合物羟基磷灰石

基本信息

批准号：
17700386
负责人：
松野寿生
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、昨年度に引き続きハイドロキシアパタイトに結合するペプチド配列を探索するために、ファージディスプレイ法を用いたペプチドライブラリーからのアフィニティセレクションを行った。ハイドロキシアパタイトは、焼結法により、形状の異なる2種類(ロッド状・球状)の粒子を調製した。これら2種類のハイドロキシアパタイト粒子それぞれを標的とし、M13バクテリオファージ上に提示されたランダムペプチドライブラリーを作用させ、特異的に結合するペプチドを提示したファージプールに濃縮する操作を行った。ペプチドライブラリーはランダムペプチド鎖長が7残基または12残基の直鎖ライブラリーおよびランダム領域が7残基の環状ライブラリーを主に使用した。濃縮操作では、1)ハイドロキシアパタイトとファージライブラリーのインキュベーション、2)特異性の低いファージの洗浄除去、3)特異性の高いファージの溶出回収、の各段階において、条件(反応時間、反応液量、バッファー種、イオン強度、温度)について検討した。その結果、環状7残基ペプチドライブラリーから、ロッド状粒子に選択的に結合するペプチド配列を3種類、直鎖12残基ライブラリーから球状粒子に強くかつ選択的に結合する配列を2種類同定した。配列間に強い相同性は存在しないが、いずれの配列においても、水酸基を側鎖に有するアミノ酸が顕著に見られた。このことから、各ペプチドは水素結合を主としてハイドロキシアパタイトに結合するが、ペプチドのコンホメーションはそれぞれ異なることが示唆された。ハイドロキシアパタイト結合ペプチドと、他の研究により同定されたビニルポリマー結合ペプチドとの融合ペプチドを調製し、ポリマー薄膜上でハイロドキシアパタイトの集積を試みたところ、調製条件の制御により様々な面密度でハイドロキシアパタイト粒子の集積が可能であることが明らかとなった。

This year, the number of participants in the competition was increased by 2000. There are two kinds of particles (spherical and spherical) in different shapes by sintering method. These 2 types of particles are labeled as M13, M13, and M13. The tips are used to indicate the concentration of the particles. The main purpose of the invention is to provide a direct chain of 7 residues and 12 residues in the chain of 7 residues. Concentration operation: 1) Dissolution of high specificity; 2) Wash removal of low specificity; 3) Dissolution recovery of high specificity; 4) Step temperature; 5) Conditions (reaction time, reaction liquid volume, reaction species, reaction intensity, temperature). As a result, the ring 7 residues are selected from 3 species, the direct chain 12 residues are selected from 3 species, and the spherical particles are selected from 2 species. There are strong similarities between the two groups. This is the first time that the United States has made such a move. In this paper, we study the effect of modulation and modulation conditions on the concentration of particles in thin films, such as surface density and particle concentration.