マラリア原虫の完全長cDNAライブラリを用いた効率的な新規DNAワクチン探索

使用疟原虫全长 cDNA 文库高效搜索新型 DNA 疫苗

• 批准号: 17710171
• 负责人: 渋井 秋子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17710171/
• 关键词: 感染症; ゲノム; DNAワクチン; 完全長cDNAライブラリ; マラリア

ネズミマラリア原虫P.berghei ANKA株の赤内型原虫を材料として、真核細胞用発現プラスミドベクターを用いて完全長cDNAライブラリを作成した。2000クローンをまとめてDNAワクチンとしてマウスに免疫し、その後チャレンジ感染を行ったところ延命効果が確認された(Vaccine.23(34):4359-66,2005)。これらのクローンの5'端をシークエンスし、特徴別にクラスタリングし、サブセット化した。具体的には、空ベクターやネズミ由来遺伝子を除いた1518クローン(DDBJ Accession No.BP113369-BP114819,BP539680-BP539746)を、ネズミマラリア原虫P.bergheiのドラフトゲノムと比較し、その結果を熱帯熱マラリア原虫P.falciparum(Pf)ゲノム配列上にマッピングした。Pfの相同遺伝子が蛋白質配列のN末端にシグナルペプチドを有するBPクローンを C群(525クローン242遺伝子)、それ以外(リボソーム蛋白質、酵素等)の遺伝子にマッピングされたBPクローンをnC群(382クローン143遺伝子)、Pfのゲノム上にマッピングされなかったBPクローンをuM群(611クローン)とした。このサブセット3群に、前回ワクチン効果のみられたG2000群とコントロールのV群を加えた計5群つき、ワクチン効果を検討した。具体的には、ジーンガンを用いてマウスを1週間おきに3回免疫し、その1週間後に原虫を感染させ、原虫感染率と生存期間を観察した。その結果、サブセットでは、G2000に比べてワクチン効果の増強は見られなかった。同様に免疫後、脾臓細胞と原虫粗抗原を共培養し、免疫応答をサイトカインELISAでアッセイしたところ、IL-2,IFN-γがG2000よりも高値のサブセットは無かった(第35回日本免疫学会総会にて発表)。

A complete cDNA clone of P. berghei ANKA strain was prepared for eukaryotic development. 2000: DNA, DNA The 5'-end of the list of features is classified into categories and categories. The specific information is as follows: 1. The origin of the virus is 1518.(DDBJ Accession No.BP113369-BP114819,BP539680-BP539746). The origin of the virus is P. berghei. The same gene of Pf has the N-terminal sequence of protein alignment: BP group C (525 genes), BP group C (382 genes), BP group M (611 genes) and other gene sequences (including protein, enzyme, etc.). The results of the three groups of G2000 and V groups are discussed. The specific infection rate of protozoa was observed after 1 week. G2000 is a new generation of high-tech enterprises. After immunization, spleen cells and protozoan crude antigen were co-cultured, and the immune response was detected by ELISA. IL-2,IFN-γ and G2000 were detected by ELISA.

项目成果

A novel method for development of malaria vaccines using full-length cDNA libraries

使用全长 cDNA 文库开发疟疾疫苗的新方法

• 发表时间: 2005
• 期刊: Vaccine 23
• 作者: Akiko Shibui;Takashi Shiibashi;Sadao Nogami;Sumio Sugano;Junichi Watanabe
• 通讯作者: Junichi Watanabe