出芽酵母Na^+/H^+交換輸送蛋白質による細胞内イオン制御の分子機構

酿酒酵母Na^+/H^+交换转运蛋白控制细胞内离子的分子机制

• 批准号: 17710186
• 负责人: 三井 慶治
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17710186/
• 关键词: 出芽酵母; イオン輸送; two-hybrid; 界面活性剤; リポソーム; イオン輸送体; 多量体化; 脂質ラフト

本研究の目的は、あらゆる生物が生きてゆく上で必須な細胞内イオン環境(特に細胞内pHとNa^+濃度)の制御機構を、その中枢に位置するイオン輸送蛋白質(Na^+/H^+交換輸送蛋白質)のイオン輸送メカニズムや制御メカニズムを分子レベルで明らかにすることである。平成19年度は、出芽酵母Na^+/H^+交換輸送蛋白質に結合し、その活性を制御しうる蛋白質分子を探索した。その方法としてNa^+/H^+交換輸送蛋白質の細胞質ドメインをベイトとしたYeast Two-Hybrid法による探索を試みた。Yeast Two-Hybrid法により内膜型Na^+/H^+交換輸送蛋白質の細胞質ドメインに結合する因子を出芽酵母cDNAライブラリーから探索した。その結果、陽性クローンとして複数のクローンが単離できた。そのなかで、非常に強い相互作用が予測されるクローンからMTH1遺伝子が同定された。また、大腸菌において発現させ精製した内膜型Na^+/H^+交換輸送蛋白質の細胞質ドメインとMTH1蛋白質が直接相互作用することを確認した。これらのことから、出芽酵母に内膜型Na^+/H^+交換輸送蛋白質と相互作用しうる因子が存在し、これらの因子が内膜型Na^+/H^+交換輸送蛋白質の機能を制御していることが示唆された。

The purpose of this study is to determine the regulatory mechanisms for the intracellular environment (especially intracellular pH and Na^+ concentration) and the central location of protein transport (Na^+/H^+ exchange protein transport). In 2019, budding yeast Na^+/H^+ exchange protein binding and activity control were explored. The method of Na^+/H^+ exchange for protein transport in cytoplasm was explored. Yeast Two-Hybrid Method for the Detection of Endoplasmic Na^+/H^+ Exchange Transport Proteins and Cytoplasmic Binding Factors in Sprouting Yeast cDNA The results are positive and the results are negative. The interaction between MTH1 and MTH1 is predicted and determined. To confirm the direct interaction between MTH1 protein and cytoplasmic Na^+/H^+ exchange protein The presence of a factor that regulates the function of an endomembrane-type Na ^+/H ^+ exchange protein in budding yeast

项目成果

Oligomerization of the Saccharomyces cerevisiae Na+/H+ antiporter Nha1p: implications for its antiporter activity.

• DOI: 10.1016/j.bbamem.2005.11.005
• 发表时间: 2005-12
• 期刊: Biochimica et biophysica acta
• 作者: Keiji Mitsui;H. Yasui;N. Nakamura;H. Kanazawa