β-プロペラ構造のプロテアーゼにおける機能解明および新規酵素造成への利用

阐明蛋白酶中β-螺旋桨结构的功能及其在构建新酶中的应用

• 批准号: 17760620
• 负责人: 小笠原 渉
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nagaoka University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17760620/
• 关键词: タンパク質分解酵素; β-プロペラ構; 酵素工学; ジペプチジルアミノペプチダーゼ; プロリルオリゴペプチターゼ; Pseudoxanthomonas; β-プロペラ; プロリルペプチダーゼ; プロテアーゼ

Pseudoxanthomonas mexicana由来のプロリルオリゴペプチダーゼ(POP)およびジペプチジルアミノペプチダーゼIV(DAP IV)のβ-プロペラドメイン領域を微生物および哺乳類由来の多くの酵素でアライメントすることで予測した。β-プロペラドメインと推定される領域では相同性はほとんど見られなかったものの、酵素の分子量が類似していたことから、β-プロペラ領域を推定することができた。β-プロペラ構造が切断されたDAP IVの精製を試みたが、精製には至らなかった。P. mexicana由来のPOPおよびDAP IVの大腸菌での酵素の大量発現系を構築し、SDS-PAGEで単一バンドまで精製を行った。これら精製酵素サンプルを用いて、結晶化条件のスクリーニングを行い、結晶化条件を見出した。現在、結晶構造解析を進めている。また、β-プロペラ構造を有するPOR, DAP IVおよびジペプチジルアミノペプチダーゼのP. mexicanaにおける役割を解明するために破壊株を作成し、栄養源および生育との関係を調査した。その結果、β-プロペラ構造を有する酵素は、栄養源獲得に重要な酵素であることを明らかにした。

Pseudoxanthomonas mexicana origin の プ ロ リ ル オ リ ゴ ペ プ チ ダ ー ゼ (POP) お よ び ジ ペ プ チ ジ ル ア ミ ノ ペ プ チ ダ ー ゼ IV (DAP IV) の beta プ ロ ペ ラ ド メ イ ン field を microbial お よ び mammals origin の more く の enzyme で ア ラ イ メ ン ト す る こ と で be し た. Beta プ ロ ペ ラ ド メ イ ン と presumption さ れ る field で は identity は ほ と ん ど see ら れ な か っ た も の の, enzyme の molecular weight が similar し て い た こ と か ら, beta プ ロ ペ ラ field を presumption す る こ と が で き た. β-プロペラ construct が cut されたDAP IV purgate を test みたが purgate に to らな った った. P. mexicana origin の POP お よ び DAP IV の coliform で の enzyme の large 発 now を build し, sds-page で 単 a バ ン ド ま で refined を line っ た. こ れ ら refining enzyme サ ン プ ル を with い て, crystallization conditions の ス ク リ ー ニ ン グ を を い, crystallization conditions show the し た. Now, the crystal structure analysis を enters めて る る. ま た, beta プ ロ ペ ラ a す を construction る POR, DAP IV お よ び ジ ペ プ チ ジ ル ア ミ ノ ペ プ チ ダ ー ゼ の p. mexicana に お け cut を る service interpret す る た め に broken 壊 strains を made し, tech students.their ownship source お よ び fertility と の を masato department investigation し た. そ の results, beta プ ロ ペ ラ a す を construction は る enzyme source, tech students.their ownship に important な enzyme で あ る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Pseudoxanthomonas mexicana WO24 株由来 dipeptidyl aminopeptidase BII の触媒残基の決定

墨西哥假黄单胞菌 WO24 菌株二肽基氨肽酶 BII 催化残基的测定

• 发表时间: 2008
• 作者: 鈴木 義之;小笠原 渉;岡田 宏文;森川 康
• 通讯作者: 森川 康

Pseudoxanthomonas mexicana WO24 株由来オリゴペプチド分解酵素の生理的役割の解明

墨西哥假黄单胞菌 WO24 菌株寡肽降解酶的生理作用的阐明

• 发表时间: 2008
• 作者: 野沢 裕;鍔 皓樹;小笠原 渉;岡田 宏文;森川 康
• 通讯作者: 森川 康

Expession of dipeptidyl aminopeptidase BII from Pseudoxanthomonas mexicana WO24 and predicting and annotating of catalytic residue

墨西哥假黄单胞菌WO24二肽氨肽酶BII的表达及催化残基的预测和注释

• 发表时间: 2008
• 作者: 鈴木 義之;小笠原 渉;岡田 宏文;森川 康
• 通讯作者: 森川 康