β-プロペラ構造のプロテアーゼにおける機能解明および新規酵素造成への利用

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Pseudoxanthomonas mexicana由来のプロリルオリゴペプチダーゼ(POP)およびジペプチジルアミノペプチダーゼIV(DAP IV)のβ-プロペラドメイン領域を微生物および哺乳類由来の多くの酵素でアライメントすることで予測した。β-プロペラドメインと推定される領域では相同性はほとんど見られなかったものの、酵素の分子量が類似していたことから、β-プロペラ領域を推定することができた。β-プロペラ構造が切断されたDAP IVの精製を試みたが、精製には至らなかった。P. mexicana由来のPOPおよびDAP IVの大腸菌での酵素の大量発現系を構築し、SDS-PAGEで単一バンドまで精製を行った。これら精製酵素サンプルを用いて、結晶化条件のスクリーニングを行い、結晶化条件を見出した。現在、結晶構造解析を進めている。また、β-プロペラ構造を有するPOR, DAP IVおよびジペプチジルアミノペプチダーゼのP. mexicanaにおける役割を解明するために破壊株を作成し、栄養源および生育との関係を調査した。その結果、β-プロペラ構造を有する酵素は、栄養源獲得に重要な酵素であることを明らかにした。