枯草菌ストレス応答系のシグナル伝達機構に関する構造研究

枯草芽孢杆菌应激反应系统信号转导机制的结构研究

• 批准号: 17770085
• 负责人: 熊坂 崇
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17770085/
• 关键词: シグナル伝達; ストレス応答; 結晶構造; 加水分解酵素; 脱リン酸化酵素; ストレス; 蛋白質; 発現制御; 微生物; 構造解析

今年度は、当初計画に基づき、枯草菌のストレス応答系の蛋白質について、発現系構築および結晶化条件の検索を中心として行った。昨年度大腸菌での高発現系を構築したSigB蛋白質については、認識DNA配列あるいはAgonistでRsbW蛋白質との複合体の結晶化スクリーニングを行ったが、これまでのところで結晶は得られていない。さらにAntagonistであるRsbV蛋白質の大腸菌での発現系を構築し、高純度で精製試料が得られた。収量が少なく結晶化には至らなかったものの今後、RsbW-RsbV複合体を目指して結晶化条件検索を進める予定である。既に我々が構造解析を行ったエネルギーストレス系に属するRsbQは、RsbPへシグナルを伝達する重要な蛋白質である。この加水分解酵素がストレスシグナル分子を分解して、RsbPのPer-Arnt-Simドメインに受け渡し、Phosphatase活性を上昇させる。得られた分子構造から、この未知シグナル分子は疎水性低分子であると考えられたため、種々の候補分子についてエステラーゼ活性の測定を行った。その結果、ややK_iが高いものの、フェノール類と短鎖のカルボン酸からなるエステルが有力な候補であることを見出した。これを受けて、RsbPのオリゴマーを乖離させるものと考えられるシグナル分子の探索を引き続き進めている。さらに、環境ストレス系においては、RsbR, RsbXの大腸菌発現系の作成に成功し、結晶化実験を試みた。その結果、RsbXにおいて、1.3Å分解能の結晶を得ることに成功した。現在、得られたX線回折データを用いて構造解析を進めるとともに、結晶化に関する報文を準備している。

In the year of this year, the original plan is based on the basic plan, the Bacillus subtilis strain, the protein content, the crystallization condition and the crystallization condition. Last year, the bacteria were highly sensitive to SigB protein, and DNA was linked to Agonist protein, RsbW protein. The complex was crystallized, and the results were analyzed. Antagonist, RsbV protein, high concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, high concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, low concentration, high concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, low concentration, high concentration, low concentration, high concentration, high concentration, low concentration, high concentration, In the future, the RsbW-RsbV complex will indicate that the crystallization conditions of the crystallization conditions have improved. Both I and I are responsible for the analysis and analysis of the system, which belongs to "RsbQ" and "RsbP". It is very important for protein production. Add water-decomposing enzymes, such as molecular decomposition enzyme, RsbPase per-Arnt-Sim enzyme, Phosphatase activity and so on. It is necessary to determine the activity of molecular chemicals, unknown molecules, water-based low molecular weight compounds, and various kinds of waiting molecules. The results of the test, K _ I, high temperature, short temperature, low temperature, low temperature, low You need to learn more about it, RsbP, and so on. You are going to learn more about the molecular exploration. The environmental and environmental environmental protection systems were successfully tested and crystallized by RsbR, RsbX and other bacteria. The results of the experiment, the results of RsbX, and the results of the decomposition energy analysis showed that the results were successful. At present, the X-ray analysis system is used to analyze the system, and the results show that the report is ready to be completed.