ゼブラフィッシュを用いた高次嗅覚神経回路の機能解析

使用斑马鱼进行高阶嗅觉神经回路的功能分析

• 批准号: 18800084
• 负责人: 森本 耕造
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18800084/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; 嗅覚; mitral cell; Dronpa; Kaede

これまでに申請者は、二次嗅覚神経特異的に遺伝子発現を誘導することが可能な遺伝子発現制御領域を同定した。これらの遺伝子発現制御領域下に各種蛍光蛋白質(DronpaおよびKaede)を発現させた。さらに、蛍光蛋白質を軸索特異的に発現させるため、軸索輸送蛋白質との融合蛋白質を設計・利用した。次に、蛍光蛋白質イメージング条件の最適化をおこなった。最適条件の検討には、一過性遺伝子発現ゼブラフィッシュを用いた。本研究では、動物1個体に対してレーザー照射を複数回行なうため、各レーザー照射について、レーザー強度・照射時間・インターバル・検出感度・回数などの最適化を行なう必要がある。しかし、十分な強度で長時間のレーザー照射を行った後でも、Dronpaの蛍光は完全には消滅しなかった。また、Kaedeについても、軸索投射の解析には不十分な蛍光回復しか実現しなかった。これらの結果より、DronpaやKaedeを用いた二次嗅覚神経軸索投射パターンの解析は難しいと考えられる。そこで、高次嗅覚神経回路を解析する新たな方法として、単一神経細胞の標識を行うことにした。適当なトランスジェニックゼブラフィッシュに、一過性に他の蛍光蛋白質を発現させることにより、一定の確立で単一神経細胞の標識が可能である。トランスジェニックラインの蛍光を元にして軸索投射パターンの解析をおこなったところ、二次嗅覚神経には様々な種類があることがわかってきた。現在、この方法を用いてさらに詳しい解析を行っている。

It is possible for the applicant and the secondary sniffing god to have a unique and special one that can induce the same situation. Dronpa およびKaede (Dronpa およびKaede) is a これらの缝子発 appeared under the control field.さらに、荍光proteinをAxon-specific に発成させるため、Axonal transport protein とのfusion protein をDesign and use した. The optimization of the conditions of the time and light protein イメージング is done. The optimal condition is the use of the best condition, and the use of the temporary residual disease. In this study, one animal was irradiated multiple times and each animal was irradiated. , レーザーintensity・irradiation time・インターバル・検出sensitivity・number of times などのoptimizationを行なうがある.しかし, ななStrength でlong time のレーザー irradiation を行った后でも, Dronpa の蛍光はcomplete には annihilation しなかった.また、Kaedeについても、Axonal projection のanalytic にはNot quite な蛍光综合しか実appear しなかった.これらのRESULT より、Dronpa やKaedeを Use いたSecond sniffing 覚神経axonal projection パターンのanalytic はdifficult しいとtest えられる.そこで, high-order sniffing 覚神経circuit analysis する新たなmethod として, 単一神経的外围投注网站LOGO line うことにした. Appropriate なトランスジェニックゼブラフィッシュに, transient light proteinを発appears させることにより, it is certain that it is established and it is possible that the mark of the single god 経 cell is possible.トランスジェニックラインの蛍光を元にしてAxonal projection パターンのanalytics をおこなったところ、Second sniffing 覚神経には様々なkind があることがわかってきた. Now, the method is used and analyzed in detail.