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Sox9周辺遺伝子導入による滑膜由来軟骨細胞分化の誘導と軟骨移植

通过 Sox9 外周基因转移诱导滑膜来源的软骨细胞分化和软骨移植

基本信息

批准号：
18890115
负责人：
古松毅之
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890115/
关键词：
軟骨細胞分化軟骨移植 Sox9 滑膜細胞

项目摘要

【1.滑膜由来間葉系幹細胞より分化誘導された軟骨細胞様Pelletの解析と比較】通常、滑膜由来間葉系幹細胞にもSox9が発現しており、Sox9導入のみでは軟骨細胞分化誘導は有意に増幅されなかった。TGFbeta添加とpellet培養法により軟骨細胞分化が誘導されるが、BMP2の同時添加により軟骨細胞分化誘導は更に促進された。Sox9強制発現細胞におけるTGF-beta・BMP2添加による分化誘導促進効果は認めなかった。また、RTPCRにてCOL2A1・Aggrecanなどの軟骨細胞特異的な遺伝子発現は、Sox9強制発現により有意に増加せず、safranin-0染色によるプロテオグリカン産生も増強されなかった。軟骨細胞分化誘導において、BMP2添加群ではCOL1A1の発現が維持されいることが判明した。これらの結果から、BMP2シグナルは軟骨細胞分化を刺激するがその効果は限定的であり、線維軟骨組織形成を促進していることが示唆された。硝子様軟骨組織を形成させるためには、持続的なBMP2刺激を避ける必要があるものと考えられた。【2.滑膜由来軟骨細胞Pelletのin vivo関節内移植後の変化】直径約2mmの軟骨様細胞塊を、家兎膝関節に作製した軟骨欠損部に充填した。1か月後の関節軟骨の変化を観察したところ、充填した軟骨細胞塊は脱落しており、周辺部での関節症性病変は認められなかった。フィブリン糊の固定性に関して有効性は認められず、充填組織の保護は、今後の課題であると考えられた。

[1. Synovium-derived mesenchymal stem cells differentiation induction and chondrocyte pellet analysis comparison] Usually, synovium-derived mesenchymal stem cells develop Sox9, Sox9 introduction and chondrocyte differentiation induction intentionally increase. TGFbeta plus pellet culture method promotes chondrocyte differentiation by adding BMP2 simultaneously. TGF-beta·BMP2 addition to Sox9-stressed cells promotes differentiation. The expression of chondrocyte-specific genes in RTPCR, COL2A1·Aggrecan, Sox9 stress, and Safranin-0 staining was intentionally increased. Chondrocyte differentiation was induced by BMP2, but the expression of COL1A1 was maintained. The results showed that BMP-2 stimulated chondrocyte differentiation and promoted chondrocyte formation. The formation of nitrate cartilage tissue is necessary to avoid BMP2 stimulation. [2. Synovial cartilage derived from Pellet in vivo after transplantation] Cartilaginous cell mass with a diameter of about 2mm was used to control and fill cartilage defects in knee joints. 1 month later, the articular cartilage changes, filling cartilage cell mass falls off, peripheral joint disease changes, The stability of the film is related to the recognition of the film, the protection of the film, and the future of the film.