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Gingipainによって切断される歯周病原性細菌病原因子の解析および同定

Gingipain裂解牙周病原菌毒力因子的分析与鉴定

基本信息

批准号：
18890144
负责人：
岸本真実
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890144/
关键词：
P.gingivalis gingipain 自然免疫バイオフィルム P. gingivalis

项目摘要

前年度は、gingipainによって切断されるCDl4依存性かつTLR2およびTLR4非依存性に自然免疫系を活性化する病原因子をP.gingivalis33277株由来gingipain完全欠損株(KDP136)より精製した。得られた精製標品をSDS-PAGEに展開し、認められたバンドをマススペクトロメトリーにより解析後、ATCC33277株のゲノム配列と照合すると、目的の病原因子はORF PGNU0748と同定された。本年度は、PGNU0748のリコンビナント蛋白(rPGNU0748)をHis tagを付与した発現ベクターにクローニングし、IPTGを添加して大腸菌で発現後、精製した。現在、全長および部分領域ごとのrPGNU0748を作成し、どの領域が7.19細胞(TLR2およびTLR4の両方の刺激伝達経路を欠くCHO細胞由来のNF-κBレポーター細胞)を活性化するのか検討している。更に、これらのrPGNU 0748を用いてポリクローナル抗体を作成し、どの領域に対するポリクローナル抗体が、rPGNU0748およびKDP136よる細胞の活性化を抑制するのか検討する予定である。また、33277株以外のP.gingivalis株におけるPGNU0748の存在様式をサザンプロッティング法で検討した。その結果、6株中3株に相似な遺伝子が認められ、PGNU0748の存在は、P.gingivalis菌株間で異なることが示された。

In the previous year, P. genivalis 33277 strains were isolated from a completely deficient strain (KDP136) of gingipain by cutting off CD14-dependent, TLR2-and TLR4-independent, natural immune system activation pathogenic factors. After SDS-PAGE analysis of purified standard, ATCC33277 strain was aligned and identified with ORF PGNU0748. This year, PGNU0748 was added to the protein (rPGNU0748) and its tag was added to the protein. Now, full-length and partial domains of rPGNU0748 were created and activated in 7.19 cells (NF-κB cells derived from CHO cells and stimulated by TLR2 and TLR4). In addition, rPGNU0748 can be used to prepare anti-tumor antibodies and to determine the extent of inhibition of cell activation by anti-tumor antibodies, rPGNU0748 and KDP136. P. genivalis strains other than 33277 were identified and the existence of PGNU0748 was investigated. The results showed that 3 out of 6 strains were similar to each other, PGNU0748 existed, and P. genivalis strains differed from each other.