ヒトB型肝炎ウイルスの感染機構の解析と創薬への応用

人乙型肝炎病毒感染机制分析及其在药物研发中的应用

• 批准号: 06F06245
• 负责人: 星野 洪郎
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06245/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; 感染性; 細胞培養; Pseudotypeウイルス; アッセイ系開発; 中和抗体; pseudotype virus; 感染価; green fluorescent protein; モノクローナル抗体; HBs抗体; 肝臓がん細胞株

B型肝炎ウイルス(hepatitis B virus: HBV)は、最も小さいウイルスのひとつである。感染者は世界中で2-3億人いると推定されており、主にアジア・アフリカに感染者が多い。しかしHBVは細胞培養系ではほとんど増殖させることができず、ウイルス学的な解析は進んでいない。ウイルスの感染性を詳細に解析したり、抗ウイルス剤をルーチンの方法を利用して開発することも余り進んでいない。Saha博士は、HBVの感染性をpseudotypeウイルスを用いて定量的に解析する方法を確立したが、一般に流行しているウイルス株にも応用できるように工夫し、さらにこれらのウイルス感染機構の解明を目指した。HBVの感染している色々の肝がん由来の細胞株やHBV遺伝子を導入した細胞株を用い、HBVのpseudotypeが形成できるか、以前と同様な方法を用いて検討した。またHBV感染の標的細胞を色々な薬剤で処理してその感受性の亢進、あるいは抑制できるか、pseudotypeウイルスを用いて解析した。HBVへの細胞の感受性は、pseudotypeウイルス感染後、細胞がgreen fluorescence protein (GFP)陽性となる程度で判定した。HBVの外被遺伝子を細胞に導入し、作製したpseudotypeウイルスの細胞の感受性は、細胞を分化させる働きのある薬剤で処理すると亢進した。細胞表面の糖鎖の働きを阻害する薬剤や、細胞表面の荷電を変化させる薬剤の処理で阻害された。HBVの外被タンパクに対する色々の単クロン抗体やヒトのHBs抗体を用い、ウイルスの中和を定量的に検出することができた。HBVに感染している人から由来したがん細胞株AlexanderやJHH-7を用い、HBVのpseudotypeを調整できた。

Hepatitis B virus (HBV) is the most common type of hepatitis. Infected people are estimated to be 200 - 300 million people in the world. HBV cell culture system is a new type of cell culture system. The infection of the virus is analyzed in detail, and the method of resisting the virus is developed. Dr. Saha established a method for quantitative analysis of HBV infectivity by pseudotype, and pointed out the time required for the identification of HBV infectivity by infection in general. HBV infection, HBV gene introduction, HBV pseudotype formation, and HBV gene replication were investigated using the same methods. The target cells of HBV infection are treated with high sensitivity, low inhibition, and high resolution of pseudotype. The sensitivity and pseudotype of HBV infected cells were determined by the degree of green fluorescence protein (GFP) positivity. HBV envelope gene is introduced into cells, and its pseudotype is controlled by its susceptibility to cell differentiation. Cell surface carbohydrate resistance agent, cell surface charge resistance agent HBV DNA is detected in the presence of anti-HBs antibodies and in the presence of anti-HBs antibodies. HBV infection in human origin, cell line Alexander JHH-7, HBV pseudotype adjustment

项目成果

爆発的な増殖能、長期生存能、可塑性を有する肝上皮性幹様細胞に対するVEGE HGF, EGFの効果

VEGE HGF和EGF对具有爆发性增殖能力、长期活力和可塑性的肝上皮干细胞的影响

• 发表时间: 2007
• 作者: 小暮公孝;石崎政利;根本雅明;志村龍男;末廣剛敏;鈴木秀樹;桑野博行;星野洪郎;小島 至;遠藤大晶;幕内雅敏
• 通讯作者: 幕内雅敏

重粒子線を利用したHIV-1感染機構の解析

利用重离子束分析HIV-1感染机制

• 发表时间: 2007
• 作者: 大槻 貴博;大上 厚志;田中 淳;Islam Salequl;清水 宣明;和田 成一;浜田 信行;舟山 知夫;小林 泰彦;星野 洪郎
• 通讯作者: 星野 洪郎

著しい増殖能と長期生存能を有する肝上性幹様細胞に対するFGFの効果

FGF 对具有显着增殖和长期活力的肝上干细胞样细胞的影响

• 发表时间: 2007
• 作者: 小暮公孝;石崎政利;根本雅明;志村龍男;末廣剛敏;鈴木秀樹;桑野博行;星野洪郎;小島 至;遠藤大晶;幕内雅敏
• 通讯作者: 幕内雅敏

HIV-1感染感受性に対する重粒子線の効果の解析

重离子束对HIV-1感染易感性的影响分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 清水宣明;大上厚志;田中淳;大槻貴博;森隆久;和田成一;小林泰彦;星野洪郎
• 通讯作者: 星野洪郎

爆発的に増殖し長期生存能と多分化能を有する肝上皮性幹様細胞の培養初期増殖形式の検討

检查爆炸性增殖并具有长期活力和多能性的肝上皮干细胞的初始生长形式

• 发表时间: 2007
• 作者: Kimitaka Kogure;Masatoshi Ishizaki;Taketoshi Suehiro;Tatsuo Shimura;Hiroyuki Kuwano;Hiroshi Yorifuji;Kuniaki Takata;Masatoshi Makuuchi.;小暮公孝;Kimitaka Kogure;小暮公孝;大上厚志;清水 晶;小暮公孝;小暮公孝;小暮公孝
• 通讯作者: 小暮公孝