急速凍結免疫エッチングレプリカ法による細胞膜裏打ち細胞骨格の制御機構解析

速冻免疫蚀刻复制法分析细胞膜内层细胞骨架的控制机制

• 批准号: 06J06371
• 负责人: 渡辺 崇
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J06371/
• 关键词: 細胞骨格; 細胞膜; 低分子量GTP結合蛋白質; 低分子GTP結合蛋白質

Rac1とCdc42の標的蛋白質であるIQGAPやSra-1は、アクチンフィラメントに直接結合することで遊走する細胞のリーディングエッジに濃縮し、ラメリポディアの形成に関与している。私は急速凍結免疫エッチングレプリカ法により、細胞膜近傍におけるRac1、IQGAP1、Sra-1の局在を電子顕微鏡下で検討した。その結果、IQGAP1とSra-1はそれぞれ異なる局在を示し、Rac1との共局在もそれぞれ特徴的であった。生化学的に細胞膜画分を分離したところ、Rac1やSra-1はTriton不溶画分(細胞骨格画分)に優位に分画されるのに対し、IQGAP1はTriton可溶画分と不溶画分に分画されるごとを見出した。これらのことから、細胞膜上のRac1は空間的に異なる場所でそれぞれの標的蛋白質を介してその生理機能を発揮することを示唆することが考えられる。細胞膜でIQGAP1は微小管結合蛋白質を介して、微小管を捕捉すると考えられている。私はCLASP2(CLIPs associating protein)をIQGAP1の新規結合蛋白質として同定し、その結合がGSK-3(Glybogen synthase kinase-3)によるCLASP2のリン酸化で負に制御されることを見出した。GSK-3は遊走細胞においてリーディングエッジで特異的に不活性化されており、CLASP2はリーディングエッジに向かう微小管にのみ局在することから、IQGAP1は局所的に微小管と細胞膜上のアクチンとを繋ぐ仲介分子であることを明らかにした。

Rac1 and Cdc42 target proteins are directly associated with the formation and concentration of Rac 1 and Cdc 42 proteins. Rapid freezing of the immune system, near the cell membrane, Rac1, IQGAP1, Sra-1 were examined under electron microscopy. IQGAP1 and Sra-1 are different from each other. Biochemistry cell membrane separation, Rac1, Sra-1, Triton insoluble fraction (cell skeleton fraction), optimal position of separation, IQGAP1, Triton soluble fraction, insoluble fraction, separation. Rac1 on the cell membrane is located in a spatially distinct location, mediating the physiological function of the target protein. Cell membrane IQGAP1 is a microtube-binding protein mediator and microtube-binding protein capture agent. CLASP2(CLIPs associating protein) is a new binding protein of IQGAP1. It binds to GSK-3(Glybogen synthase kinase-3), and CLASP2 binds to GSK-3. GSK-3 and CLASP-2 are specifically inactivated in the middle of the cell cycle, and IQGAP-1 is activated in the middle of the cell cycle, and IQGAP-1 is activated in the middle of the cell cycle.

项目成果

蛋白質 核酸 酵素 細胞骨格と接着

蛋白质、核酸、酶、细胞骨架和粘附

• 发表时间: 2006
• 作者: 松本 耕二;中村 隆;落合 啓之;津村 博文;中村 隆;T.Nakamura;T.Nakamura;T.Nakamura;中村 隆;北村 倫也;Brandt Dominique;三島 正規;王 淑杰;渡辺 崇;渡辺 崇
• 通讯作者: 渡辺 崇

Structural basis for tubulin recognition by cytoplasmic linker protein 170 and its autoinhibition

• DOI: 10.1073/pnas.0703876104
• 发表时间: 2007-06-19
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Mishima, Masaki;Maesaki, Ryoko;Hakoshima, Toshio
• 通讯作者: Hakoshima, Toshio

Phosphorylation of CLASP2γ by GSK-3β regulates the interaction with IQGAP1 and EB1

GSK-3β 磷酸化 CLASP2γ 调节与 IQGAP1 和 EB1 的相互作用

• 发表时间: 2008
• 作者: 松本 耕二;中村 隆;落合 啓之;津村 博文;中村 隆;T.Nakamura;T.Nakamura;T.Nakamura;中村 隆;北村 倫也;Brandt Dominique;三島 正規;王 淑杰;渡辺 崇
• 通讯作者: 渡辺 崇

IQGAP3, a novel effector of Rac1 and Cdc42, regulates neurite outgrowth

• DOI: 10.1242/jcs.03356
• 发表时间: 2007-02-15
• 期刊: JOURNAL OF CELL SCIENCE
• 影响因子: 4
• 作者: Wang, Shujie;Watanabe, Takashi;Kaibuchi, Kozo
• 通讯作者: Kaibuchi, Kozo