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エンドサイトーシス及び細胞接着におけるAlix相同蛋白質HD-PTPの機能解析

Alix同源蛋白HD-PTP内吞和细胞粘附功能分析

基本信息

批准号：
06J06712
负责人：
市岡史高
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J06712/
关键词：
Alix HD-PTP ESCRT エンドソーム Brox CHMP4

项目摘要

研究員が以前に行った解析から、HD-PTPがAlixと同様に、ESCRT関連因子を含め、様々なエンドサイトーシス関連蛋白質と結合することが明らかとなった(Ichioka et al.,Arch.Biochein.Biophys.,(2007)457,142-149)。そこで本研究では、HD-PTPおよびAlixのエンドソームにおける局在に着目し、ヒト培養細胞株(HeLa細胞)を用いて、共焦点レーザー顕微鏡による細胞内局在観察を行った。固定細胞を用いた免疫蛍光染色法の結果から、単量体型緑色蛍光蛋白質(mGFP)融合蛋白質として発現させたHD-PTP(mGFP-HD-PTP)が、細胞内において、初期エンドソームおよびMVB(multivesicular body)に局在することが明らかとなった。また生細胞を用いたtime-lapse観察において、エンドソームに取り込まれた蛍光標識EGF(上皮由来成長因子)とmGFP-HD-PTPまたはAlix-mGFPの、一過的な共局在が観察された。これらの細胞内局在観察および蛋白質間相互作用解析の結果から、HD-PTPおよびAlixが、エンドソーム膜上において様々な蛋白質と結合することで、エンドサイトーシス経路の制御に関与していることが示唆された。本研究結果については、ESCRTに関する英国生化学会特別集会Biochemical Society Focused Meeting(ESCRTs,2008)において、発表を行った。

Researchers previously analyzed HD-PTP, Alix, ESCRT and related factors, including protein binding (Ichioka et al., Arch.Biochein.Biophys., (2007)457,142-149)。In this study, we investigated the intracellular effects of HD-PTP and Alix in cultured HeLa cells using confocal microscopy. The results of immunoluminescence staining in fixed cells showed that the HD-PTP(mGFP-HD-PTP) fusion protein was detected in a single volume, and that the MVB(multicellular body) fusion protein was detected in a single volume. The growth cells were detected by time-lapse detection, and the light markers EGF(Epithelial-derived Growth Factor) and mGFP-HD-PTP were detected. The results of the analysis of the interaction between proteins and proteins in the intracellular system show that HD-PTP and Alix are related to the regulation of protein binding on the membrane. The results of this study are relevant to the proceedings of the Biochemical Society Focused Meeting(ESCRT,2008).