Gタンパク質共役型受容体G2Aの活性化機構解明および生体内における機能解析

G蛋白偶联受体G2A激活机制阐明及体内功能分析

• 批准号: 06J11249
• 负责人: 谷口 尚加 (村上 尚加)
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J11249/
• 关键词: Gタンパク質共役型受容体; 転写制御; プロトン; マクロファージ; プロモーター

1.G2AとLPC(lysophosphatidylcholine)の相互作用かあるか。(1)G2Aの点変異体で、pH感受性を保つたまま、LPC感受性を失った変異体の作成に成功した。このことはLPCとヒトG2Aとの直接の相互作用を示唆するとして、現在、放射性標識されたLPCを用いてLPCとG2Aの相互作用を確認中である。(2)一方で、LPCとG2Aの相互作用の有無を検討するため、Biacoreを用いた系も検討するべく準備を進めている。2.ヒトG2Aのプロモーター解析(1)ヒト末梢血を用いた5'RACEの結果より決定した転写開始点をもとに、その直上のプロモーターに結合する因子を同定した。(2)当該プロモーター領域と、認識転写因子との直接的結合をChIP解析により検出し、in vivoにおける、転写因子とcis-エレメントの相互作用も示された。現在投稿中である。3.ヒトG2Aの細胞内輸送解析(1)工学部・長棟輝行研究室の構築した、細胞膜表面に存在する受容体のみをラベル化する技術を用い、G2Aの細胞膜近傍における受容体の動きを経時的に観察した。LPCと細胞外pH依存的に、細胞膜表面のG2A受容体がinternalizeされる速度に差がある結果が得られ、現在そのメカニズムを生化学的に解析中である。

1. The interaction between G2A and LPC (lysophosphatidylcholine). (1) G2A's point-based allogeneic system, pH-sensitive system, and LPC-sensitive system were successfully constructed.このことはLPCとヒトG2A and とのdirect interaction をshows するとして, now, the radioactive label されたLPCを is confirmed with いてLPCとG2Aのinteraction を中である. (2) One side, LPC and G2A's interaction, there is no interaction, Biacore's system is ready, and Biacore is ready. 2. Analysis of ヒトG2A のプロモーター (1) ヒトPeripheral blood test result of いた5'RACEりdeterminationした転write starting pointをもとに、その正上のプロモーターにcombineするfactorを同定した. (2) When the domain of the program is directly combined with the recognition factor and the ChIP analysis is performed, in vivoにおける、転WRITING FACTORとcis-エレメントのInteractionもshowされた. Submission is now underway. 3. Intracellular transport analysis of TotoG2A (1) Construction and detection of the presence on the cell membrane surface by Teruyuki Nagato Laboratory, Faculty of Engineering The use of the container's chemical transformation technology and the G2A's cell membrane close proximity to the container's movement and detection of the container. LPC is dependent on the extracellular pH, the G2A receptor on the cell membrane surface is internalized, the speed is different, and the result is obtained, and the current biochemical analysis is being carried out.