Gタンパク質共役型受容体G2Aの活性化機構解明および生体内における機能解析

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1.G2AとLPC(lysophosphatidylcholine)の相互作用かあるか。(1)G2Aの点変異体で、pH感受性を保つたまま、LPC感受性を失った変異体の作成に成功した。このことはLPCとヒトG2Aとの直接の相互作用を示唆するとして、現在、放射性標識されたLPCを用いてLPCとG2Aの相互作用を確認中である。(2)一方で、LPCとG2Aの相互作用の有無を検討するため、Biacoreを用いた系も検討するべく準備を進めている。2.ヒトG2Aのプロモーター解析(1)ヒト末梢血を用いた5'RACEの結果より決定した転写開始点をもとに、その直上のプロモーターに結合する因子を同定した。(2)当該プロモーター領域と、認識転写因子との直接的結合をChIP解析により検出し、in vivoにおける、転写因子とcis-エレメントの相互作用も示された。現在投稿中である。3.ヒトG2Aの細胞内輸送解析(1)工学部・長棟輝行研究室の構築した、細胞膜表面に存在する受容体のみをラベル化する技術を用い、G2Aの細胞膜近傍における受容体の動きを経時的に観察した。LPCと細胞外pH依存的に、細胞膜表面のG2A受容体がinternalizeされる速度に差がある結果が得られ、現在そのメカニズムを生化学的に解析中である。