鉄硫黄クラスター合成系(SUFマシナリー)の心臓部SufBCD複合体の構造と機能

SufBCD复合物的结构和功能，铁硫簇合成系统的核心（SUF机械）

• 批准号: 06J50642
• 负责人: 北岡 伸太郎
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J50642/
• 关键词: 鉄硫黄クラスター; SUFマシナリー; X線結晶構造解析; ATP分解酵素

鉄硫黄クラスター合成系SUFマシナリーの中で、中心的な役割を果たすと推定されるSufBCD複合体の機能及び構造の解明を目的に、以下の実験を実施した。大腸菌において、大腸菌由来sufオペロン全体を過剰発現させ、可溶性画分にSufBCD複合体を発現させることに成功した。さらに、上記の組み換え大腸菌を大量培養し、高純度のSufBCD複合体を精製する系を確立した。精製したSufBCD複合体サンプルを用いて、ゲルろ過クロマトグラフィー、動的光散乱法、SDS-PAGEによって複合体の分子量ならびに複合体中のSufB、C、Dの構成比率を見積もることに成功した。また、結晶化条件スクリーニングを行なった。さらに、大腸菌以外のsuf遺伝子もターゲットとして研究を行った。高度好熱菌Archaeoglobus fulgidusはiscS、iscU、sufB、sufC遺伝子をもっており、これらが鉄硫黄クラスター合成に関わっていると考えられる。Afulgidus由来SufBC複合体と大腸菌由来SufBCD複合体は類似した構造と機能をもつと考え、その解明を目的として以下の実験を実施した。A.fulgidus由来のSufBCホモログの発現プラスミドを構築し、大腸菌での過剰発現に成功した。さらに、高純度精製系を確立し、得られたサンプルを用いて結晶化スクリーニングを行なった。その結果、複数の条件で結晶を得ることに成功し、条件の最適化を行なった。SPring-8におけるX線回折実験の結果タンパク質結晶由来の回折点を確認することができた。

The synthesis of sulfur compounds is based on the presumption that the SUF complex is capable of understanding the purpose of the SufBCD complex in the middle and center of the SufBCD complex. The pathogen of suf fungus and the origin of the fungus were detected in all the samples, and the soluble SufBCD complex was used to show that the bacteria were successful. Make sure that the bacteria are cultured in large quantities and that the semen of high-grade SufBCD complex is in good condition. The ratio of SufB, C, D in the SufBCD complex was determined by DNA sequencing, dynamic light scattering, SDS-PAGE DNA sequencing, molecular weight analysis, DNA sequencing, DNA sequencing. The conditions of crystallization and crystallization are different. In addition to the fungus, suf fungus, please do some research on it. The highly good bacteria Archaeoglobus fulgidus iscS, iscU, sufB, and sufC were tested in the presence of sulfur, sulfur, and synthesis. The origin of Afulgidus is the origin of SufBC complex. The type of SufBCD complex is similar to that of the machine. The purpose of this study is to determine the following information. The reason for the A.fulgidus is that you can see that you are successful because of your SufBC symptoms, and that you have been successful because of your success. The system of high precision and high precision is to make sure that you can make sure that you can use the results to crystallize the accuracy of the system. The result of the experiment and the result of the complex condition show that the condition is successful, and the condition is the most effective. The results of the SPring-8 X-line back-to-back test results show that the reason for the failure is that the return point confirms that the error is not correct.