リン酸化前のSTAT二量化のリン酸化およびシグナル伝達における役割について

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昨年度までに、二量化したSTAT4-GFPと1FN-α receptor chain-2(1FNAR2)がIFN-αによる刺激以前に相互作用していることが示された。更に、この細胞にIFN-αで刺激を加えると、STAT4-GFP二量体がIFNAR2から解離することが示された。本年度は昨年度の研究結果を基に、IFN-α刺激によるSTAT4-GFPの挙動の変化について更に研究を行った。以前の研究により、ヒト繊維芽細胞におけるIFN-αシグナリングでは、STAT2がSTAT4の活性化に必須であることが示されている。そこで、STAT4-GFPの挙動とSTAT2の関係について調べた。その結果STAT2非存在下でもSTAT4-GFP二量体はIFNAR2と相互作用すること、しかしSTAT4-GFP二量体のIFN-α添加によるIFNAR2からの解離にはSTAT2が必要であることが示された。このことは以前の研究を支持するもので、我々の観察しているSTAT4-GFP二量体のIFNAR2からの解離がSTAT4の活性化を意味していることを示している。更にSTAT4内のリン酸化を受けるチロシン残基を変異させた変異型STAT4-GFPを観察したところ、変異型STAT4-GFPでもIFNAR2と相互作用することが示された。このことはSTAT4-GFP二量体とIFNAR2の結合が検出限界以下のリン酸化の結果ではなく、未リン酸化STAT4-GFP二量体がIFNAR2に結合していることを証明する物である。更に、IFN-αで刺激を加えても変異型STAT4-GFPはIFNAR2と相互作用し続けていたことから、STAT4のリン酸化がSTAT4-GFP二量体がIFNAR2から解離するのに必要であることが示された。前年度の成果も含めて論文を執筆し、現在投稿中である。