関節軟骨へのsiRNA導入法の確立-変形性関節症の新しい保存療法の開発へ向けて-

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変形性関節症(OA)治療へsiRNAを応用するためには病期に応じた病原因子の抑制が必要と考えるために,OA動物モデルの病態解析を行った。ラット左膝前十字靱帯を切離し,OAモデルを作成した(ACLT群)。対照として関節切開のみを行ったラットを用いた(sham群)。手術後1,2,3,4,7および10週後に関節軟骨を採取し,肉眼的および組織学的評価を行った。また,関節滑膜を採取し,real-time RT-PCRを用いてプロテアーゼ,炎症性サイトカインの発現を検討した。ACLT群において肉眼的および組織学的に関節軟骨の変性は経時的に進行した。OA肉眼スコアはsham群に比べて高値であった。滑膜中ではプロテアーゼであるa disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like motifs-5(ADAMTS-5;aggrecanase-2)がACLT群で初期に発現亢進していたが,経時的に発現は低下した。ACLT群のADAMTS-5の発現は術後1,3および4週でsham群に比べて有意に高値であった。この結果を元に,siRNAを用いてin vitroで滑膜線維芽細胞におけるADAMTS-5の発現抑制を試みた。ラット膝関節から滑膜線維芽細胞を単離し,ADAMTS-5に対するsiRNA(siADAMTS-5)を導入した。ADAMTS-5の発現抑制効果をreal-time RT-PCRを用いて検討した。siADAMTS-5を導入した滑膜線維芽細胞ではADAMTS-5の発現が有意に低下した。本研究では,OAモデルの初期において滑膜でADAMTS-5が高発現していることを明らかにした。さらに,siRNAを用いてin vitroでADAMTS-5の発現抑制が可能であることを示した。