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関節軟骨へのsiRNA導入法の確立-変形性関節症の新しい保存療法の開発へ向けて-

关节软骨导入siRNA方法的建立 - 致力于开发骨关节炎的新保守疗法 -

基本信息

批准号：
18791049
负责人：
新井祐志
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791049/
关键词：
small interfering RNA 変形性関節症関節滑膜 ADAMTS-5 動物モデル sonoporation 関節軟骨滑膜

项目摘要

変形性関節症(OA)治療へsiRNAを応用するためには病期に応じた病原因子の抑制が必要と考えるために,OA動物モデルの病態解析を行った。ラット左膝前十字靱帯を切離し,OAモデルを作成した(ACLT群)。対照として関節切開のみを行ったラットを用いた(sham群)。手術後1,2,3,4,7および10週後に関節軟骨を採取し,肉眼的および組織学的評価を行った。また,関節滑膜を採取し,real-time RT-PCRを用いてプロテアーゼ,炎症性サイトカインの発現を検討した。ACLT群において肉眼的および組織学的に関節軟骨の変性は経時的に進行した。OA肉眼スコアはsham群に比べて高値であった。滑膜中ではプロテアーゼであるa disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like motifs-5(ADAMTS-5;aggrecanase-2)がACLT群で初期に発現亢進していたが,経時的に発現は低下した。ACLT群のADAMTS-5の発現は術後1,3および4週でsham群に比べて有意に高値であった。この結果を元に,siRNAを用いてin vitroで滑膜線維芽細胞におけるADAMTS-5の発現抑制を試みた。ラット膝関節から滑膜線維芽細胞を単離し,ADAMTS-5に対するsiRNA(siADAMTS-5)を導入した。ADAMTS-5の発現抑制効果をreal-time RT-PCRを用いて検討した。siADAMTS-5を導入した滑膜線維芽細胞ではADAMTS-5の発現が有意に低下した。本研究では,OAモデルの初期において滑膜でADAMTS-5が高発現していることを明らかにした。さらに,siRNAを用いてin vitroでADAMTS-5の発現抑制が可能であることを示した。

The use of siRNA in the treatment of osteoarthritis (OA) is necessary for the inhibition of pathogenic factors in OA animals. The left knee front cross is cut off, and the OA is cut off. The joint is cut open. 1, 2, 3, 4, 7, and 10 weeks after surgery, the articular cartilage was taken and evaluated macroscopically and histologically. In addition, joint synovium samples were collected and real-time RT-PCR was used to detect the development of inflammatory diseases. ACLT group is a macroscopic and histological study of articular cartilage. The unaided eye of a woman A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-like motifs-5(ADAMTS-5; aggretase-2) in synovium increased in the early stage of ACLT group, but decreased in the middle stage. ADAMTS-5 in the ACLT group appeared at 1, 3 and 4 weeks after surgery. As a result,siRNA was used in vitro to inhibit ADAMTS-5 expression in synovial cells. ADAMTS-5 siRNA(siADAMTS-5) was introduced into the synovial cells of the knee joint. ADAMTS-5 gene expression inhibition effect was investigated by real-time RT-PCR. siADAMTS-5 was introduced into synovial cells, but the expression of ADAMTS-5 was intentionally reduced. In this study, ADAMTS-5 was found to be highly active in the early stages of OA. In addition, siRNAs can be used in vitro to inhibit ADAMTS-5 expression.