ゲノム2次元電気泳動法による子宮筋腫特異的なゲノム変化の同定

使用二维基因组电泳鉴定子宫肌瘤特异性基因组变化

• 批准号: 18791158
• 负责人: 山縣 芳明
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791158/
• 关键词: 子宮筋腫; DNAメチル化; DNAメチル

手術時摘出子宮から子宮筋腫組織と正常子宮筋組織を採取し、それぞれゲノムDNAを抽出し、ゲノムDNAメチル化パターンの相違をRestriction Landmark Genomic Scanning (RLGS)法を用い七解析した。その結果、約1800個からなるDNA断片が展開された。子宮筋腫では正常子宮筋に比較し17 個領域が低メチル化に、12個領域が高メチル化となっていた。従って、筋腫は多くの遺伝子領域のDNAメチル化異常があることが明らかとなった。RLGS解析により、正常子宮筋と子宮筋腫との間でメチル化パターンが異なっていた遺伝子領域の同定を行った。ゲノムDNAをNotl-PvuII-PsIで切断した時の理論的2次元電気泳動パターンをコンピューター上で展開した(virtual RLGS)。実際に正常子宮筋と子宮筋腫でメチル化に違いがあった領域に対応するスポットをvirtual RLGS上で抽出し塩基配列を決定する方法を用いた。これにより正常子宮筋に比べ子宮筋腫で低メチル化状態となっていた1つの領域(481 bp)を向定した。実際に、この領域が子宮筋腫で低メチル化状態であることをNntIを用いたmethylation sensitive PCR法で確認した。ヒトゲノムデータベースからこの領域の遺伝子検索を行ったところ、同領域は既知の遺伝子領域ではなかったが、塩基配列から新たな遺伝子の存在が予想された。RT-PCR法によりmRNA発現を調べたところ、この領域からmRNAが転写されていた。さらに、多症例の正常子宮筋層、子宮筋腫で同領域のメチル化の状態を調べた結果、多くの症例で子宮筋腫では低メチル化状態であり、mRNA発現は亢進していることが明らかとなった。

During the operation, the normal tissue was extracted, the DNA was extracted, the DNA was extracted, and the Restriction Landmark Genomic Scanning (RLGS) method was used for analysis. The results showed that about 1800 different DNA fragments were unfolded. The number of normal sub-regions is higher than that of 17 low-level industries and 12 high-level ones. In the sub-field of DNA, there is an increase in the number of tendons and tendons, and there are many problems in the subfield. The RLGS parses the data, and the normal sub-domain is the same as that in the sub-domain. To cut off the second dimension of the time theory of DNA Notl-PvuII-PsI, the swimming motion is open to virtual RLGS. In the international market, there are many problems in the field of virtual RLGS, such as the extraction of the base column, the determination of the method and the use of the method. The normal sub-tendon is lower than the normal sub-tendon. The status of the normal sub-tendon is lower than that of the normal sub-tendon. The status of the normal sub-tendon is much lower than that of the normal sub-tendon. The field (481 bp) is oriented. In the international market and in the field, please use the methylation sensitive PCR method to confirm the status of the NntI. In the same field, we know that in the same field, we know that there are some problems in the sub-domain, such as the number of people in the field, and the number of people in the same field. In the RT-PCR method, the mRNA method shows that it is necessary to write the information in the field of mRNA. In multiple cases, the symptoms are normal, the symptoms are normal, the symptoms are in the same field, the results are in the same field, and in the cases of multiple diseases, the symptoms are low, and the symptoms of mRNA are abnormal.