アシルCoA合成酵素の新機能の応用酵素学的解析

酰基辅酶A合成酶新功能的应用酶学分析

• 批准号: 07J00457
• 负责人: 安部 智子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J00457/
• 关键词: Pseudomonas; クラスター; アシルCoA合成酵素; 脂肪酸; CoA; チオール化合物; アミド化合物

本研究で対象とするPseudomonas chlororaphis B23菌は、ニトリルヒドラターゼ(NHase)によりニトリルを水和してアミドにし、さらにアミダーゼ(Amidase)により酸とアンモニアに分解する。本ニトリル遺伝子クラスター下流に存在するアシルCoA合成酵素遺伝子の産物(AcsA)は、脂肪酸とCoAのチオエステル結合形成を触媒してアシルCoAを合成する。本酵素において、CoAに代わるチオール基質については研究が行われていなかったが、CoAの代わりにL-cysteineやチオール含有アミノ酸誘導体等を用いた時に新たな反応産物ピークが検出された。これら新規反応産物の同定を行った結果、脂肪酸基質とL-Cysteineがアミド結合した化合物であることが判明した。即ち、アシルCoA合成酵素はCoA以外にもL-Cysteineを基質にすることができ、さらに、本来のチオエステル結合(-CO-S-)形成だけではなく、アミド結合(-CO-NH-)形成をも触媒することをこれまでに明らかにした。さらに、Saccharomyces cerevisiaeのアセチルCoA合成酵素を用い、酢酸とL-cysteine、ATPを加えて酵素反応を行った場合にも同様に新たな反応産物の生成が認められた。アシルCoA合成酵素はadenylate-forming superfamilyに属し、甲虫ルシフェラーゼも本、superfamilyに含まれる。そこで、ホタルルシフェラーゼを用い、ルシフェリンとL-cysteineを基質として本新規反応を検討した結果、反応産物の分離およびMS分析に成功し、本酵素においても新規反応産物の生成が確認された。以上のことから、本新規合成反応はP.chlororaphis B23のアシルCoA合成酵素やアシルCoA合成酵素ファミリーに限らず、adenylate-forming superfamilyに属する酵素が普遍的に持つ活性であると考えられる。次に、本新規反応における脂肪酸基質について基質特異性を調べた結果、数種の脂肪酸において産物であるN-Acyl-L-cysteineの生成が確認された。また、脂肪酸基質を固定し、L-Cysteine以外の化合物(L-Cysteine類似化合物・チオール化合物・アミン等)を用いた場合にも反応が進行するかどうかを調べた結果、新規の反応産物の生成が確認された。

The results of this study are as follows: Pseudomonas chlororaphis B23, NHase, water, Amidase, acid, acid and decomposition. In this experiment, CoA synthesis enzymes (AcsA), fatty acids (CoA) and fatty acids (Fatty acids) were combined to form a catalyst for CoA synthesis. This enzyme enzyme, CoA, and CoA were used to detect the presence of maleic acid, etc. The results of the determination of the new antioxidants and the combination of the fatty acid base L-Cysteine antioxidants and the compound antioxidants were determined. That is, in addition to the CoA synthesis enzyme CoA, the L-Cysteine biosynthetic enzyme is activated. The combination of the enzyme (- CO-S-) and the original enzyme (- CO-S-) results in the formation of the catalyst (- CO-NH-). Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces cerevisiae, L-cysteine, ATP, and oxalic acid were used to synthesize the enzyme to form the new enzyme. The CoA synthesis enzyme adenylate-forming superfamily belongs to the beetle, the beetle contains the enzyme, and the superfamily contains the enzyme. The results of this new regulation anti-virus test, the separation of anti-drug products, the success of MS analysis, the generation of new anti-drug products, and the generation of new anti-drug products, such as the results of the results of this new regulation, the results of L-cysteine, the results of MS analysis, the success of MS analysis, and the generation of new rules and regulations. In this new synthesis, P.chlororaphis B23, CoA synthetic enzyme, adenylate-forming superfamily enzyme, enzyme. Secondary, this new regulation reverses the results of fatty acid-based fatty acid base-specific N-Acyl-L-cysteine test results, and several kinds of fatty acid-based fatty acid carbohydrates do not produce confirmation products. Pure, fatty acid base immobilization, L-Cysteine other compounds (L-Cysteine type similar to compound, compound, etc.) are used to analyze the results, and the new specification generates a confirmation test.

项目成果

アシルCoA合成酵素のニトリル代謝における役割および新規アミド/ペプチド合成活性の発見

发现酰基辅酶A合成酶在腈代谢中的作用和新型酰胺/肽合成活性

• 发表时间: 2009
• 作者: 安部智子;橋本義輝;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

アシルCoA合成酵素および adenylate-forming superfamily 酵素の新規アミド結合触媒反応

酰基辅酶A合成酶和腺苷酸形成超家族酶的新型酰胺键催化

• 发表时间: 2008
• 作者: 安部智子;橋本義輝;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

脂肪酸代謝酵素の基質特異性

脂肪酸代谢酶的底物特异性

• 发表时间: 2008
• 作者: 安部智子;橋本義輝;保坂英明;富田-横谷香織;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

アセチルCoA合成酵素およびアシルCoA合成酵素の新規触媒反応:アミド/ペプチド結合形成反応

乙酰辅酶A合成酶和酰基辅酶A合成酶的新型催化反应：酰胺/肽键形成反应

• 发表时间: 2009
• 作者: 安部智子;橋本義輝;小林達彦
• 通讯作者: 小林達彦

Novel amide (peptide) bond synthetic activity observed in the superfamily of adenylate-forming enzyme

在腺苷酸形成酶超家族中观察到的新型酰胺（肽）键合成活性

• 发表时间: 2008
• 作者: Hashimoto;Y.;Abe;T.;Kobayashi;M.
• 通讯作者: M.