ナノアクチュエータとして機能するタンパク質モータプレスチンの駆動機構の解明
阐明作为纳米执行器的蛋白质马达prestin的驱动机制
基本信息
- 批准号:07J01898
- 负责人:
- 金额:$ 1.79万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2007
- 资助国家:日本
- 起止时间:2007 至 2009
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
プレスチンは内耳蝸牛内の外有毛細胞の細胞膜に存在する膜タンパク質である.これまで,電子顕微鏡や原子間力顕微鏡を用いてプレスチンの構造解明が試みられてきた.しかし,プレスチンの構造は未だ不明である.そこで本研究では,プレスチンを精製し,人工脂質膜に埋め込み,そして原子間力顕微鏡で観察することで,プレスチンの詳細な構造を明らかにすることを試みた.まず,FLAGタグ融合プレスチン発現細胞から,プレスチンを含む膜タンパク質を細胞から界面活性剤を用い可溶化した.そして,膜タンパク質溶液からFLAGタグアフィニティカラムを利用してプレスチンを精製した.並行して,人工脂質膜を雲母基板上に自己組織化能を利用し作製した.さらに,界面活性剤を利用し,脂質膜を弱らせた.続いて,界面活性剤に覆われた精製プレスチンを脂質膜に加え,界面活性剤を希釈法により除去し,プレスチンを脂質膜に再構成した.その後,再構成したプレスチンを原子間力顕微鏡で観察した.原子間力顕微鏡で脂質膜を観察した結果,高密度に存在するリング形状の構造物が確認された.それらの構造物の直径を計測すると,11.0±1.3nm(n=42)であった.この値は,過去に報告されているプレスチンの直径と良く一致する.本研究では,プレスチンを精製しているため,脂質膜に存在する構造物は全てプレスチンであると考えられる.以上のことから,本研究で観察された構造物はプレスチンであるとみなせる.すなわち本研究の結果は,プレスチンが脂質膜中で直径約11nmのリング形状を形成することを示唆する.本研究は世界に先駆けてプレスチンを高分解能で可視化したものであり,聴覚の研究領域に留まらず,膜タンパク質の研究領域においても重要な成果である.
The membrane of outer hairy cells in inner ear snails exists. The electron microscope and the atomic force microscope are used to solve the structural problems. The structure of the building is not clear. In this study, we try to refine the structure of artificial lipid membrane, and examine the structure of artificial lipid membrane with atomic force microscope. Flag-based fusion proteins are used to develop cell cultures, including membrane proteins, cell cultures, and interfacial active agents. The film is made from a mixture of solvent and solvent. In parallel, artificial lipid membrane on mica substrate self-organization can be used for production. In the meantime, the surfactant is utilized, and the lipid membrane is weakened. In addition, the interfacial active agent is refined and added to the lipid film, and the interfacial active agent is removed by the method, and the lipid film is reconstituted. After that, the atomic force microscope was used to observe the structure. The results of atomic force microscopy of lipid films confirm the existence of highly dense structures in the shape of lipid films. The diameter of these structures was measured at 11.0 ± 1.3 nm (n=42). This value is consistent with previous reports. In this study, the structure of lipid membrane was refined and examined. This study examines the structure of the structure. The results of this study show that the shape of lipid membrane with a diameter of about 11 nm is formed. This study is the first in the world to develop high resolution visualization, and it is an important achievement in the field of membrane quality research.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
High resolution imaging by atomic force microscopy of prestin purified and reconstituted into an artificial lipid bilayer
通过原子力显微镜对 prestin 进行高分辨率成像,纯化并重构为人工脂质双层
- DOI:
- 发表时间:2010
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:浅田弘法;古谷正敬;西尾 浩;升田博隆;内田 浩;丸山哲夫;梶谷 宇;木挽貢慈;吉村泰典;鈴木翔;丸山哲夫;熊野峻
- 通讯作者:熊野峻
Immune atomic force microscopy of prestin-transfected CHO cells using quantum dots
- DOI:10.1007/s00424-008-0560-z
- 发表时间:2009-02
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:M. Murakoshi;Koji Iida;S. Kumano;H. Wada
- 通讯作者:M. Murakoshi;Koji Iida;S. Kumano;H. Wada
Remarkable enhancement of the activity of prestin by point mutation
通过点突变显着增强 prestin 的活性
- DOI:
- 发表时间:2009
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:和田仁;他;Tetsuo Maruyama;丸山哲夫;熊野峻
- 通讯作者:熊野峻
Misfolding and mislocalization by mutations of the motor protein prestin
运动蛋白 prestin 突变导致的错误折叠和错误定位
- DOI:
- 发表时间:2007
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:高野哲至;村松真臣;村上亮;並木亮;高橋義朗;Michio Murakoshi;熊野峻;熊野峻;熊野峻;熊野峻;熊野 峻
- 通讯作者:熊野 峻
Effects of mutations in unique amino acids of prestin in its characteristics
prestin独特氨基酸突变对其特性的影响
- DOI:
- 发表时间:2008
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:高野哲至;村松真臣;村上亮;並木亮;高橋義朗;Michio Murakoshi;熊野峻;熊野峻;熊野峻
- 通讯作者:熊野峻
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- 作者:
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松尾光一
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- 作者:
高野哲至;村松真臣;村上亮;並木亮;高橋義朗;Michio Murakoshi;熊野峻;熊野峻;熊野峻;熊野峻;熊野 峻;熊野 峻;Koichi Matsuo;Koichi Matsuo;Norifumi Kawakami;松尾光一;Hidenori Watanabe;Koichi Matsuo - 通讯作者:
Koichi Matsuo
Secondary-Structure Analysis of Intermediate States of Apo-Myoglobin and Pepsin using a Vacuum-Ultraviolet Circular Dichroism Spectroscopy
使用真空紫外圆二色光谱法对载脂肌红蛋白和胃蛋白酶的中间态进行二级结构分析
- DOI:
- 发表时间:
2009 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
高野哲至;村松真臣;村上亮;並木亮;高橋義朗;Michio Murakoshi;熊野峻;熊野峻;熊野峻;熊野峻;熊野 峻;熊野 峻;Koichi Matsuo;Koichi Matsuo;Norifumi Kawakami;松尾光一;Hidenori Watanabe - 通讯作者:
Hidenori Watanabe
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