ホスファチジルエタノールアミン生合成系酵素の構造機能解析

ホスファチジルエタノールアミン生合成系に属するEKI、ECT、EPTの3つの酵素について、酵素間の相互作用解析をおこなうことを目指して研究を進めた。【酵素EKIと酵素ECTの相互作用解析】酵素EKIは平成19年度に確立した大腸菌を宿主とする発現系を用いて大量に発現させ、高純度の精製タンパク質を調製することに成功しか。本研究課題以前に確立した発現・精製系を用いてECTの精製サンプルを調製し、EKIとの相互作用解析を行った。その結果、EKIとECTの間には分子間相互作用が存在しないことが強く示唆された。【酵素EPTと酵素ECTの相互作用解析】メタノール資化酵母Pichia pastorisを宿主とする膜タンパク質EPTの発現系構築を目指したが目的の発現系を得ることができなかった。そこで、大腸菌を宿主とするEPTの発現系を用いて精製EPTの調製を試みた。EPTのN末端側に付加したアフィニティー精製タグを利用した精製によりEPTの純度を上げることができたが、EPTは非常に不安定であることが分かった。精製EPTを用いてECTとの相互作用解析を行ったが、EPTとECTの間には分子間相互作用が存在しないことが強く示唆された。

ホスファチジルエタノールアミン生合成系に属するEKI、ECT、EPTの3つの酵素について、酵素間の相互作用解析をおこなうことを目指して研究を進めた。【酵素EKIと酵素ECTの相互作用解析】酵素EKIは平成19年度に確立した大腸菌を宿主とする発現系を用いて大量に発現させ、高純度の精製タンパク質を調製することに成功しか。本研究課題以前に確立した発現・精製系を用いてECTの精製サンプルを調製し、EKIとの相互作用解析を行った。その結果、EKIとECTの間には分子間相互作用が存在しないことが強く示唆された。【酵素EPTと酵素ECTの相互作用解析】メタノール資化酵母Pichia pastorisを宿主とする膜タンパク質EPTの発現系構築を目指したが目的の発現系を得ることができなかった。そこで、大腸菌を宿主とするEPTの発現系を用いて精製EPTの調製を試みた。EPTのN末端側に付加したアフィニティー精製タグを利用した精製によりEPTの純度を上げることができたが、EPTは非常に不安定であることが分かった。精製EPTを用いてECTとの相互作用解析を行ったが、EPTとECTの間には分子間相互作用が存在しないことが強く示唆された。