タイプI繰返し型ポリケタイド合成酵素の機能解析

I型重复聚酮合酶的功能分析

• 批准号: 07J03790
• 负责人: 森口 智美
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J03790/
• 关键词: ポリケタイド合成酵素; 6-メチルサリチル酸合成酵素; Aspergillus terreus; 脱水酵素; チオエステラーゼ; Asergillus terreus

糸状菌のポリケタイド合成酵素は、一本のポリペプチド鎖上の触媒酵素ドメインが繰返して反応に関与する繰返し型タイプI(IPKS)に分類され、共通のドメイン構造を持ちながら、還元反応、メチル化反応、生成物の炭素鎖長の制御とともに縮合サイクル特異的な環化反応によって、多種多様な炭素骨格の化合物ライブラリーを与える。本研究では、未だ不明であるIPKSの高次構造や酵素特異的な反応制御機構の解明を目的とし、Aspergillus terreus由来の6-メチルサリチル酸(6-MSA)合成酵素ATXを取り上げ、大腸菌発現系を用いて調製した精製タンパクを用いて種々の機能解析を行っている。前年度までに、ATXの触媒ドメインのうち、脱水酵素に共通した活性中心配列HxxxGxxxxPを持つ事から脱水酵素DHドメインとされてきたドメイン(DH様ドメイン)が、チオエステラーゼ(TE)活性を有することを見出していた。本年度の研究では、その反応メカニズムと、当ドメインの立体構造の解明を目的とした検討を行った。まず、DH様ドメインの活性中心HisをAlaに変異させたDHmと、^<14>C標識基質を反応させると、DHmま6-MSAを生成できずにテトラケタイド中間体を結合したままであることを確認していたことから、その結合領域の同定を試みた。^<14>C中間体結合型DHmのトロンビン消化断片のうち、^<14>C標識された断片は、N末シーケンシングによりACPを含むことが確認されたため、中間体はDHmのACP上に結合していることが明らかとなった。次に、ACP結合型中間体の摸倣体である、6-MSAのSNAC誘導体を合成し、野生型ATXと反応させ、DH様ドメインのTE活性の動的パラメーターを算出した。以上の検討により、ATXのDH様ドメインは、既知のTEとは異なり、ACP結合型中間体を直接加水分解するというメカニズムで反応を触媒することを明らかにした。現在、DH様ドメインを含む部分長タンパクATXDHの、X線結晶構造解析に向けた精製条件を検討中である。

A variety of bacterial enzymes are synthesized, including catalytic enzymes on a variety of molecular chains, catalytic enzymes on a variety of molecular chains, catalytic enzymes on a variety of molecular chain, catalytic enzymes on a variety of molecular chain, and catalytic enzymes on a variety of The purpose of this study is to clarify the higher-order structure of IPKS and the enzyme-specific anti-ATX regulatory mechanism. The origin of Aspergillus terreus and the functional analysis of ATX 6-MSA synthase are discussed. In the past year, ATX catalyst and dehydro enzyme common active center allocation HxxxGxxxxP continued to work, dehydro enzyme DH and DH (DH), and dehydro enzyme (TE) activity. This year's research is aimed at solving the problem of three-dimensional structure. The active center of DH is different from that of DHm and C. The active center of DH is different from that of DHm <14>and C. The active center of DHm and 6-MSA is different from that of DHm and 6-MSA. The active center of DH is different from that of DHm and C. The active center of DH is different from that of DHm and C. <14>C intermediate binding type DHm digestion fragment,^<14>C identification fragment, N terminal, ACP, identification fragment, intermediate binding type DHm ACP, identification fragment In addition, the model of ACP-binding intermediate, 6-MSA SNAC inducer, wild-type ATX, DH and TE activity were calculated. Based on the above discussion, it is clear that ATX's DH sample equipment is different from the known TE and can serve as a catalyst for the direct hydrolysis of ACP-bound intermediates. At present, DH parameters include the length of ATXDH, X-ray crystal structure analysis and the refinement conditions.

项目成果

糸状菌Aspergillus terreus由来6-メチルサリチル酸合成酵素ATXの機能解析

丝状真菌土曲霉来源的 6-甲基水杨酸合酶 ATX 的功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: Nakamura;S. Narumi;T. Yoshiz ato;S-I. Tsutsui;K-I. Iijima;T;Ken Harada;松田侑大;Masakazu Kobayashi;徳永欽也;Akiko Noda;伊藤崇敬;横里充弘;徳永欽也;小林正和;松田侑大;Hisashi Umeda;Isao Fujii;Kazumasa Unno;藤井勲;Yuichiro Yamada;森口智美
• 通讯作者: 森口智美

Functiollal AIlalysis of Iterative Type I Polyketide Synthase from Aspzergillus terreus

土曲霉迭代 I 型聚酮合酶的功能分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Tomomi Moriguchi;Yutaka Ebizuka;Isao Fujii;Takahashi Ryuta;高橋隆太;森口智美;高橋 隆太;Tomomi Moriguchi;高橋 隆太;森口 智美;Tomomi Moriguchi
• 通讯作者: Tomomi Moriguchi

Domain-domain Interactions in the Iterative Type I Polyketide Synthase ATX from Aspergillus terreus

土曲霉迭代 I 型聚酮合酶 ATX 中的域-域相互作用

• 发表时间: 2008
• 期刊: ChemBioChem 9
• 作者: Yamada;M. Sato;Y. Iijima;T. Tsutsui;K-I;Tomomi Moriguchi
• 通讯作者: Tomomi Moriguchi

Functional Analyses on 6-Methylsalicylic Acid Synthase from Aspergillus terreus

土曲霉6-甲基水杨酸合成酶的功能分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Tomomi Moriguchi

Domain-domain interactions in the iterative type I polyketide synthase ATX ffom Aspergillus terreus

土曲霉迭代 I 型聚酮合酶 ATX 中的域-域相互作用

• 发表时间: 2008
• 期刊: ChemBioChem 9(掲載確定)
• 作者: Tomomi Moriguchi;Yutaka Ebizuka;Isao Fujii
• 通讯作者: Isao Fujii