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リンパ管内皮細胞分化を司る転写調節機構の解明

阐明控制淋巴管内皮细胞分化的转录调控机制

基本信息

批准号：
07J05914
负责人：
吉松康裕
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J05914/
关键词：
Prox1 VEGF-C VEGFR3 Ets-2 TM-Ets-1 リンパ管新生 TM-Ets1 リンパ管無菌性腹膜炎モデル Proxl Ets-1

项目摘要

マウス発生期14.5日目の胎児胚においてソートされた血管内皮細胞およびリンパ管内皮細胞においてEts-2が発現していることが確認され、生体内のリンパ管内皮細胞でもEts-2の発現していることで生物学的により信憑性の高い結果を得ることができた。昨年度までにProx1結合因子として同定したEts-2が実際にリンパ管内皮細胞HDLECにおいてProx1と結合していることが免疫沈降により示されていたが、近年開発されたin situ Proximity Ligation Assayにより両者の結合を分子レベルで検討したところ、両者の結合が検出された。これによりリンパ管内皮細胞内でEts-2がProx1と直接結合していることを示唆する証拠がさらに得られた。血管内皮細胞HUVECにおいて他のProx1下流遺伝子integrin α9の発現がEts familyのdominant-negative mutantであるTM-Ets-1により抑制されることが明らかになり、TM-Ets-1によるVEGFR3の発現低下の結果(昨年度まで)と合わせて、複数のProx1下流遺伝子がEts familyの転写活性によって制御されていることが示唆された。内皮細胞において発現することが知られているEts family転写因子について血管内皮およびリンパ管内皮における発現を確認し、また293T細胞においてProx1との結合性を検討したところ、複数のEts family転写因子がProx1と結合することを見出した。HUVECにおいてProx1とEts-2を発現させてクロマチン免疫沈降を行ったところ、両者に対する抗体で、Prox1とEts-2それぞれのDNA結合(予測)配列を含むVEGFR3のプロモーター領域が免疫沈降され、Prox1とEts-2がVEGFR3のプロモーターに直接結合することがわかった。以上のことから、リンパ管内皮細胞でEts family転写因子がProx1の機能調節因子として働いていることが示され、リンパ管新生を制御する転写調節因子を同定することができた。

The development of Ets-2 in vascular endothelial cells and vascular endothelial cells of fetal embryos at 14.5 days was confirmed. The development of Ets-2 in vascular endothelial cells in vivo was confirmed. Prox1 binding factor and Ets-2 were found in HDLEC cells in the past year, and in situ Proximity Ligation Assay was developed in recent years. Ets-2 and Prox-1 bind directly to the endothelial cells of the vascular system. The expression of integrin α9 in HUVEC cells was inhibited by TM-Ets-1, a dominant-negative mutant of the Ets family, and the expression of VEGFR3 in TM-Ets-1 was decreased. Endothelial cell development was identified by Ets family factors in vascular endothelium and vascular endothelium, and Prox1 binding in 293T cells was identified by Ets family factors in Prox1 binding. HUVEC contains Prox1 and Ets-2, which are produced by immunoprecipitation, antibody, and Ets-2. DNA binding (prediction) sequences are produced by direct binding to VEGFR 3, including immunoprecipitation, Prox1 and Ets-2. The Ets family of factors that regulate the function of Prox1 in vascular endothelial cells is also known as the regulatory factors that regulate vascular regeneration.